肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子腺病毒修飾人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)腎缺血再灌注損傷治療的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor，HGF)腺病毒表達(dá)載體并修飾人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cordmesenchymal stem cells，hucMSCs)，HGF修飾后hucMSCs(HGF-hucMSCs)的生物學(xué)特性研究；建立大鼠腎臟缺血再灌注致急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)模型，評(píng)價(jià)經(jīng)頸動(dòng)脈注射HGF-hucMSCs對(duì)大鼠AKI的治

2、療效果及初步探討其可能機(jī)制。
　　 方法：利用pAdEasy-1系統(tǒng)構(gòu)建HGF腺病毒表達(dá)載體；經(jīng)過(guò)包裝、擴(kuò)增后感染hucMSCs，通過(guò)ELISA，RT-PCR，流式細(xì)胞術(shù)等研究HGF-hucMSCs的生物學(xué)特性。采用大鼠雙側(cè)腎蒂夾閉60min再灌注的條件建立大鼠腎臟缺血再灌注導(dǎo)致急性腎損傷模型；于損傷后16h將1.0×106 HGF-hucMSCs經(jīng)左頸動(dòng)脈輸注損傷大鼠模型，分別于損傷0h、16h、24h、48h、72h后采集尾

3、靜脈血檢測(cè)血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)濃度，綜合運(yùn)用分子生物學(xué)、免疫組織化學(xué)、病理學(xué)、定量PCR、Western blot等技術(shù)，與對(duì)照組，生理鹽水輸注組及假手術(shù)組對(duì)比，評(píng)價(jià)HGF-hucMSCs的治療效果并找尋修復(fù)腎損傷的機(jī)制。
　　 結(jié)果：HGF-hucMSCs在體外具有與親代hucMSCs相似的基本生物學(xué)特性。體內(nèi)HGF-hucMSCs移植組較hucMSCs，GFP-hucMSCs組Cr、BUN水平顯著降低(p＜0.

4、05)。增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫組化顯示HGF-hucMSCs治療組陽(yáng)性細(xì)胞的比例高于在hucMSCs或GFP-hucMSCs處理組。此外，受傷治療腎組織HGF-hucMSCs也表現(xiàn)在恢復(fù)過(guò)程中腎組織充血減少和較少的腎小管管型。免疫組織化學(xué)及活體成像證實(shí)，HGF-hucMSCs確實(shí)到達(dá)了腎損傷部位。實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，HGF-hucMSCs也抑制caspase-3和IL-1β在損傷腎組織中的表達(dá)。TUNEL法結(jié)果表明，HGF-