人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合絲素蛋白多孔支架構(gòu)建組織工程脂肪的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells, hUCMSCs）的體外分離、培養(yǎng)的方法，觀察其生物學(xué)特性；2.探討絲素蛋白多孔支架與hUCMSCs共培養(yǎng)構(gòu)建組織工程脂肪的可行性。
　　方法：1.從新鮮的人臍帶中獲取華通氏膠，組織塊法提取人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，MMT法檢測(cè)并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面特征性標(biāo)記，成脂誘

2、導(dǎo)培養(yǎng)21天，油紅O染色觀察成脂情況；2.hUCMSCs細(xì)胞接種于絲素蛋白多孔支架，觀察細(xì)胞黏附率，MTT法測(cè)定及熒光染色觀察細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)情況，成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞在支架上的成脂分化能力，將經(jīng)成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后的細(xì)胞支架復(fù)合物接種于S-D大鼠體內(nèi)，觀察細(xì)胞支架復(fù)合物在體內(nèi)的成脂能力。
　　結(jié)果：1.體外培養(yǎng)2周，組織塊周圍有梭形細(xì)胞游出；傳代培養(yǎng)至第10代，細(xì)胞形態(tài)與增殖能力無(wú)明顯變化；流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD44、CD

3、105陽(yáng)性，CD14、CD34陰性。成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后表明hUCMSCs具有成脂能力，油紅O染色見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)中有紅染的脂滴聚集。2.細(xì)胞在絲素蛋白多孔支架上有良好的黏附率，12h后平均黏附率超過(guò)80％。MTT法檢測(cè)顯示接種于絲素蛋白多孔支架上的細(xì)胞與貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。熒光倒置相差顯微鏡下觀察到，細(xì)胞與絲素蛋白支架共培養(yǎng)1～2天后細(xì)胞與支架充分附著，培養(yǎng)7～10天后生長(zhǎng)活躍。共培養(yǎng)1周后序貫成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)2周，RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞

4、Oct-4表達(dá)減弱，表達(dá)aP2和LPL。將共培養(yǎng)1周序貫成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)2周的細(xì)胞支架復(fù)合物植入S-D大鼠皮下，4周后取出，見(jiàn)有脂肪組織形成；8周后支架降解明顯，有新生脂肪組織形成；12周后支架降解完全，脂肪組織形成明顯；對(duì)照組無(wú)明顯脂肪組織生成。
　　結(jié)論：1. hUCMSCs能在體外培養(yǎng)、擴(kuò)增及表現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞的生物特性；2. hUCMSCs具有向脂肪細(xì)胞方向分化的特性，可作為脂肪組織工程的種子細(xì)胞；3.絲素蛋白多孔支架與細(xì)胞共培