腺病毒介導的shRNA抑制cFLIP高表達對結(jié)直腸癌細胞TRAIL耐藥影響的研究.pdf

1、目的:應用含cFLIPshRNA元件的腺病毒感染對TRAIL耐藥的結(jié)直腸癌細胞SW620,研究抑制cFLIP表達對該細胞耐藥的逆轉(zhuǎn)及細胞凋亡的影響。
　　 方法:
　　 1.將結(jié)腸癌細胞系SW620進行復蘇、傳代培養(yǎng)。
　　 2.應用已構(gòu)建好的hU6啟動子調(diào)控的cFLIPshRNA元件的腺病毒,感染SW620細胞,選用無意義序列病毒進行對照。
　　 3.應用a)RT-PCR和Westernblot檢測細胞

2、中cFLIPmRNA水平及蛋白水平表達量的變化;b)流式細胞技術(shù)檢測病毒感染前后結(jié)腸癌細胞凋亡情況。
　　 結(jié)果:cFLIPmRNA表達水平目的基因組(0.12±0.02)明顯低于無意義序列轉(zhuǎn)染組(即陰性對照組,0.38±0.01)和空白對照組(0.41±0.03),差異具有顯著性(P＜0.05);cFLIPL蛋白表達水平目的基因組(0.75±0.12)明顯低于無意義序列轉(zhuǎn)染組(即陰性對照組,1.09±0.06)和空白對照組(1

3、.12±0.10),差異具有顯著性(P＜0.05);感染+TRAIL組細胞凋亡率(34.16±2.43%)明顯高于未感染組細胞(5.07±1.16%)、未感染+TRAIL組細胞(12.84±2.33%)及感染組細胞(6.51±1.56%),差異具有顯著性(P＜0.05),表明抑制細胞內(nèi)cFLIP高表達后其對TRAIL敏感性升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:結(jié)直腸癌細胞TRAIL耐藥與細胞內(nèi)cFLIP高表達有關(guān),抑制cFLIP高