香草醛吸嗅改善C57小鼠抑郁樣行為及其機(jī)制的探索.pdf

1、研究背景和研究目的：
　　抑郁癥是由于腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)功能紊亂及相關(guān)腦區(qū)功能異常所致的神經(jīng)精神性疾病,發(fā)病率呈逐年上升趨勢。目前,最主要的干預(yù)手段是藥物治療,輔以心理治療及物理治療,但長期服用藥物存在副反應(yīng)重,依從性差,經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重等問題。嗅覺系統(tǒng)通過嗅神經(jīng)與腦直接相連,從而提供了腦與外界的直接相連。且與管理情緒的相關(guān)腦區(qū)密切相關(guān),使得通過嗅覺通路調(diào)節(jié)情緒,改善腦功能,干預(yù)抑郁癥成為可能。芳香物質(zhì)能夠愉悅情緒,相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)丁香酚通過嗅覺

2、通路能夠緩解抑郁癥小鼠的抑郁樣行為。本實驗就是通過芳香物質(zhì)香草醛吸嗅影響慢性抑郁癥小鼠及嗅球毀損后抑郁癥小鼠,評價其在抑郁癥干預(yù)中的作用通路及其在抑郁癥干預(yù)中的作用;探索其作用機(jī)制;為抑郁癥的嗅覺通路干預(yù)提供理論支持。
　　第一部分小鼠抑郁癥傾向的行為學(xué)觀察
　　方法:C57雄性小鼠,60只,隨機(jī)分組,均單籠飼養(yǎng)。45只為慢性不可預(yù)知性應(yīng)激模型(CUMS)+孤養(yǎng)組,余皆為嗅球毀損組。CUMS+孤養(yǎng)組在造模3W后行抑郁癥的行為

3、學(xué)評估;嗅球毀損組小鼠在手術(shù)前、后行嗅覺辨識,1W后行抑郁癥的行為學(xué)評估。抑郁癥行為學(xué)評估試驗包括懸尾實驗(TST)、強(qiáng)迫游泳實驗(FST)、24h糖水消耗實驗(SWC)。
　　結(jié)果：
　　CUMS+孤養(yǎng)組經(jīng)過21天慢性不可預(yù)見性刺激后,與實驗前相比,懸尾實驗和強(qiáng)迫游泳實驗的小鼠不動時間顯著延長(P<0.01),24h糖水消耗量顯著減少(P<0.01),表明小鼠有明顯的抑郁樣行為;嗅球毀損組小鼠實驗前后嗅覺辨識結(jié)果表明手術(shù)后

4、嗅球毀損完全(P<0.01),行為學(xué)指標(biāo):懸尾實驗中小鼠不動時間明顯延長(P<0.05),強(qiáng)迫游泳實驗不動時間顯著延長(P<0.01),24h糖水消耗量顯著減少(P<0.01),表明嗅球毀損引起動物的抑郁樣改變。以上各指標(biāo)反映動物抑郁癥時的無助心理及快感缺乏情況。兩種造模方法均成功的建立了抑郁癥模型。
　　第二部分香草醛吸嗅改善小鼠抑郁樣行為實驗
　　方法:將所有實驗小鼠分成4組(每組10只):嗅球毀損組、香草醛組、百憂解組

5、和模型組。前兩組給予香草醛吸嗅進(jìn)行干預(yù)。吸嗅時間為5W,評價不同時間點干預(yù)后抑郁癥緩解情況。評價指標(biāo)同抑郁癥建模指標(biāo)。
　　結(jié)果:百憂解組在干預(yù)2W后懸尾實驗不動時間顯著減少(P<0.01),強(qiáng)迫游泳實驗不動時間明顯減少(P<0.05),4W后24h糖水消耗量顯著增加(P<0.05);香草醛組小鼠2W后懸尾實驗及強(qiáng)迫游泳實驗不動時間均明顯減少(P<0.05),3W后24h糖水消耗量顯著增加(P<0.05)。嗅球毀損組及無干預(yù)模型組

6、在吸嗅5W后均無明顯變化。表明香草醛可以改善小鼠抑郁樣行為,是通過嗅覺通路而非呼吸系統(tǒng)發(fā)揮作用。
　　第三部分香草醛改善抑郁樣行為可能機(jī)制的探索
　　方法:免疫組織化學(xué)方法檢測小鼠血漿5-HT、皮質(zhì)醇含量及小鼠腦組織BDNF、海馬區(qū)5-HT表達(dá),以探索香草醛緩解小鼠抑郁樣行為的可能作用機(jī)制;
　　結(jié)果:經(jīng)吸嗅干預(yù)5W,行為學(xué)得到改善后,所測小鼠血漿5-HT含量經(jīng)組間比較,香草醛組與模型組比較血漿5-HT含量(P<0.0

7、5),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。與模型組比較,香草醛組皮質(zhì)醇含量有降低趨勢,但未達(dá)到顯著意義水平(P=0.792),與正常組比較未達(dá)到顯著意義水平(P=0.06),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與正常組比較,BDNF檢測結(jié)果無顯著性改變。但數(shù)據(jù)顯示香草醛組BDNF表達(dá)增加,高于嗅球毀損組及模型組?？赡苡袃煞矫娴脑颌俑深A(yù)過程中,抑郁癥的行為學(xué)改變發(fā)生在前,腦生化指標(biāo)改變發(fā)生相對滯后,小鼠處死時可能還沒有達(dá)到腦生化指標(biāo)改變發(fā)生完全的時間點;②可能由于實驗中的

8、樣本量(每組10只)過少,從而導(dǎo)致陰性結(jié)果。免疫組化圖片經(jīng)圖像分析處理顯示,與模型組及嗅球毀損組相比,香草醛組海馬區(qū)5-HT表達(dá)明顯增高,提示香草醛緩解抑郁癥可能是通過影響海馬區(qū)的結(jié)構(gòu)及功能重塑密切相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.抑郁癥與嗅覺密切相關(guān)。嗅球毀損后可以引起實驗動物抑郁樣改變。
　　2.嗅球毀損導(dǎo)致動物產(chǎn)生抑郁樣行為的可能原因:嗅球毀損導(dǎo)致動物與外界交流的減少,引起腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的改變及相關(guān)腦區(qū)功能及結(jié)構(gòu)發(fā)生改變