Panne xin1對(duì)慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣行為的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：重度抑郁癥（majo r depre ss io n d isord er，MDD）日漸成為對(duì)全球影響較為廣泛的精神類疾病，嚴(yán)重影響個(gè)體的健康以及生活質(zhì)量。Panne xin1（Panx1）是近年來(lái)在脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的一種新型縫隙連接通道（gap junction channels，GJCs），隨著GJCs在大腦神經(jīng)環(huán)路中的作用愈加明顯，本文建立小鼠的慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激（chronic social defeat stress，CSD

2、S）模型，以檢測(cè)與抑郁行為相關(guān)腦區(qū)中Panx1的蛋白以及基因表達(dá)的變化，并對(duì)其相互作用的復(fù)合物離子型嘌呤受體7（purinergic inotropic receptor7，P2RX7）的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，以確定其在抑郁行為中的作用機(jī)制。
　　方法：采用CSDS暴露構(gòu)建小鼠抑郁模型；利用糖水偏好檢測(cè)（sucrose preference test，SPT），社會(huì)接觸檢測(cè)（social interaction test，SIT）等行為學(xué)

3、檢測(cè)其抑郁樣行為；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，Q-PCR）定量分析目的基因的表達(dá)差異；蛋白免疫印跡（western blotting）檢測(cè)目的蛋白表達(dá)水平的改變；免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）檢測(cè)蛋白復(fù)合物之間的結(jié)合能力。
　　結(jié)果：
　　（1）經(jīng)慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激暴露的小鼠產(chǎn)生抑郁樣行為，其糖水偏好率與正常組相比顯著下降，社會(huì)接觸時(shí)間明顯縮

4、短；
　?。?）與正常對(duì)照組相比，CSDS小鼠的抑郁相關(guān)腦區(qū)中間前額皮層（medium prefrontal cortex，mPFC）、海馬、杏仁核中，其基因水平均未發(fā)生顯著差異；
　?。?）與正常對(duì)照組相比，抑郁敏感小鼠mPFC中的Panx1蛋白表達(dá)水平下降；
　?。?）在CSDS模型中，杏仁核和海馬腦區(qū)中的Panx1蛋白與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯改變；
　?。?）與對(duì)照組相比，CSDS組mPFC區(qū)P2RX7的蛋白

5、表達(dá)量顯著降低；
　?。?）與對(duì)照組相比，CSDS組杏仁核中P2RX7的蛋白表達(dá)量也顯著降低；但海馬中P2RX7的蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化；
　?。?）免疫共沉淀結(jié)果顯示，慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激模型小鼠Panx1與其復(fù)合體P2 RX7的結(jié)合能力顯著減弱。
　　結(jié)論：經(jīng)慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激的小鼠表現(xiàn)出明顯的抑郁樣行為。與行為學(xué)相對(duì)應(yīng)，抑郁敏感小鼠的mPFC中，Panx1的蛋白水平表現(xiàn)出顯著的降低趨勢(shì)，與其相互作用的復(fù)合體P2RX7的表

6、達(dá)水平也顯著下調(diào)。另外，Panx1與P2RX7的結(jié)合能力減弱可能參與其抑郁樣行為的發(fā)病機(jī)制。
　　第二部分Pannexin1在小鼠抑郁樣行為中的作用
　　目的：Pannexin（Panx）與connexin（Cx）是脊椎動(dòng)物中重要的兩個(gè)GJCs家族，在神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的交流中起到橋梁的作用，Cx目前在情感類神經(jīng)環(huán)路以及突觸可塑性中發(fā)揮重要作用，而具有相似解剖學(xué)結(jié)構(gòu)的Panx是否也參與其中，其功能以及作用都還不清楚。本部分將著

7、重研究Panx1這一在神經(jīng)組織中表達(dá)最為廣泛的Panx家族成員蛋白，在抑郁樣行為中的功能作用。
　　方法：采用腦區(qū)立體定位技術(shù)進(jìn)行腦區(qū)定位給藥；使用縫隙連接通道的通用抑制劑甘珀酸（carbenoxolone，CBX）以及Panx1通道的特異性阻斷劑10Panx，檢測(cè)SPT以及新型攝食抑制（noverty suppression food test，NSFT）行為學(xué)的改變。
　　結(jié)果：
　?。?）側(cè)腦室分別給予藥理學(xué)阻斷

8、劑100μM CBX和100μM10Panx，檢測(cè)隨后1h，3h以及14h內(nèi)的糖水消耗率，與溶劑對(duì)照組相比，給藥組小鼠均表現(xiàn)出降低的趨勢(shì)；在3h后的新型攝食抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，與溶劑對(duì)照組相比，給藥組表現(xiàn)出顯著的攝食時(shí)間延長(zhǎng)，由此將給藥后3 h的時(shí)間點(diǎn)確定為行為學(xué)檢測(cè)時(shí)間；
　?。?）設(shè)置側(cè)腦室給予10Panx的藥物濃度梯度（10μM，50μM，100μM，200μM），當(dāng)給予100μM10Panx時(shí)，小鼠的糖水偏好率與溶劑組相比

9、明顯降低；同時(shí)其攝食時(shí)間與溶劑對(duì)照組相比也顯著延長(zhǎng)，因此確定10Panx誘導(dǎo)抑郁樣行為的有效給藥濃度為100μM；
　?。?）mPFC區(qū)給予藥理學(xué)阻斷劑10Panx，同樣誘導(dǎo)出小鼠的抑郁樣行為，在10Panx濃度為50μM時(shí)，小鼠的糖水偏好率與溶劑組相比顯著降低；其攝食延遲時(shí)間與溶劑組相比顯著延長(zhǎng)。
　　結(jié)論：Panx1具有維持正常小鼠神經(jīng)系統(tǒng)生理功能的作用，抑制Panx1通道使其功能缺失，能誘導(dǎo)出小鼠抑郁樣行為，從而模擬抑