2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  本研究采用小鼠慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型(Chronic unpredictable stress,CUS),研究枸杞籽油(Lycium barbarumseed oil,LBSO)對慢性應(yīng)激引起的抑郁樣行為(Depression-like behavior)和認(rèn)知能力障礙(Cognitive deficits)的影響;并以中樞海馬(Hippocampus)為研究對象,以期揭示LBSO的應(yīng)激保護作用是否涉及抑制海馬神經(jīng)元的損

2、傷及BDNF信號通路的調(diào)制。
  方法:
  采用小鼠慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型(Chronic unpredictablestress,CUS)。雄性ICR小鼠90只,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后隨機分為6組:正常組、模型組、陽性藥物組(氟西汀,Fluoxetine,20mg/kg)、枸杞籽油低、中、高(2.5ml/kg,5ml/kg,10ml/kg)劑量組,每組15只,藥物干預(yù)時間35天。除正常組群養(yǎng)于獨立的實驗室外,其余5組小鼠獨籠飼養(yǎng)

3、,并接受28天慢性不可預(yù)知刺激造模,這些刺激包括夾尾1min、4℃冰水游泳刺激5min、噪音刺激10min、禁食禁水24h、束縛1h、足底電擊5min(30V,0.5Hz)、通宵照明、潮濕墊料。造模完成后所有小鼠依次接受曠場實驗(Open field test,OFT)、懸尾實驗(Tail suspension test,TST)、強迫游泳實驗(Forced swim test,FST)、Morris水迷宮(Morris water m

4、aze,MWM)四種行為學(xué)檢驗,共計7天。行為學(xué)檢驗完成后用4%水合氯醛麻醉小鼠,待角膜反射消失后眶叢取血,經(jīng)離心后得血清用于Elisa法測定血清皮質(zhì)酮含量。小鼠經(jīng)取血后,分兩種方式取材。每組10只小鼠取血后處死,開顱取海馬,液氮速凍后轉(zhuǎn)入超低溫冰箱凍存。小鼠海馬用于免疫印跡實驗(Western Blot,WB),每組剩余小鼠心臟依次灌注生理鹽水和4%多聚甲醛,灌注完成后開顱取全腦,石蠟包埋后切片。腦切片用于組織形態(tài)學(xué)實驗(包括HE染色

5、和尼氏染色)和免疫組織化學(xué)實驗(Immunohistochemistry,IM)。
  結(jié)果:
  1.枸杞籽油對慢性應(yīng)激小鼠抑郁樣行為的影響:
  a.在曠場實驗(OFT)中。與正常組相比,模型組小鼠穿越的格數(shù)降低(p<0.01);與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠穿越的格數(shù)升高(p<0.01)。
  b.在懸尾實驗(TST)中。與正常組相比,模型組小鼠的不動時間升高(p<0.05);與模型組相比,除

6、枸杞籽油中劑量組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異外,各試驗藥物組小鼠的不動時間顯著降低(p<0.01,p<0.05)。
  c.在強迫游泳實驗(FST)中。與正常組相比,模型組小鼠的不動時間顯著升高(p<0.01);與模型組相比,枸杞籽油低、中、高三個劑量組小鼠的不動時間均顯著降低(p<0.01)。
  以上實驗結(jié)果表明:枸杞籽油可改善慢性應(yīng)激小鼠的抑郁樣行為。
  2.枸杞籽油對慢性應(yīng)激小鼠認(rèn)知障礙的影響:
  a.在Morr

7、is水迷宮(MWM)的空間記憶采集實驗中。與正常組相比,模型組小鼠的逃逸潛伏期顯著升高(p<0.05);與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠的逃逸潛伏期顯著降低(p<0.01)。與正常組相比,模型組小鼠的平均潛伏距離顯著升高(p<0.05);與模型組相比,除枸杞籽油中劑量組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異外,各試驗藥物組小鼠的平均潛伏距離顯著降低(p<0.01,p<0.05)??臻g記憶采集實驗結(jié)果表明:枸杞籽油能緩解慢性應(yīng)激小鼠的學(xué)習(xí)能力下降。

8、
  b.在Morris水迷宮(MWM)的空間探索實驗中。與正常組相比,模型組小鼠的原平臺象限游程比率顯著降低(p<0.01);與模型組相比,枸杞籽油高劑量組小鼠的原平臺象限游程比率顯著身高(p<0.05)。與正常組相比,模型組小鼠的原平臺象限時間比率顯著降低(p<0.01)。與模型組相比,各試驗藥物組與模型組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與正常組相比,模型組小鼠的原平臺有效穿越次數(shù)顯著降低(p<0.01);與模型組相比,枸杞籽油高劑量組小

9、鼠的原平臺有效穿越次數(shù)顯著升高(p<0.01)。與正常組在第三象限極有目的性的探索軌跡相比,模型組小鼠在整個迷宮中的探索是無傾向性、無目的性的。與模型組無目的性的軌跡相比,除枸杞籽油中劑量組無明顯差異外,各試驗藥物組小鼠的探索軌跡有較強的目的性??臻g探索實驗結(jié)果表明:枸杞籽油可能緩解慢性應(yīng)激小鼠的記憶障礙。
  3.枸杞籽油對慢性應(yīng)激小鼠血清皮質(zhì)酮的影響:
  在Elisa測定小鼠血清皮質(zhì)酮的實驗中。與正常組相比,模型組小鼠

10、的血清皮質(zhì)酮顯著升高(p<0.01);與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠的血清皮質(zhì)酮顯著降低(p<0.01、p<0.05)。Elisa結(jié)果表明:枸杞籽油可以改善慢性應(yīng)激小鼠的血清皮質(zhì)酮含量升高。
  4.組織形態(tài)學(xué)結(jié)果:
  a.HE染色結(jié)果:相比于正常組,模型組小鼠CA1區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)量顯著低于正常組(p<0.05)與模型組相比,氟西汀和枸杞籽油低、高劑量組小鼠的CA1區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)量均顯著高于模型組(p<0.05,

11、p<0.01)。表明枸杞籽油可改善慢性應(yīng)激小鼠的神經(jīng)元細(xì)胞丟失。
  b.尼式染色結(jié)果:與正常組比較,模型組小鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列不規(guī)則,細(xì)胞間隙增大,細(xì)胞胞體內(nèi)的尼氏小體減少或完全消失,細(xì)胞固縮。與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠的CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊緊湊,其胞體內(nèi)部的尼氏小體清晰可見。表明枸杞籽油可改善慢性應(yīng)激小鼠的神經(jīng)元損傷。
  5.免疫組織化學(xué)結(jié)果:
  a.BDNF:與正常組相比,模型組

12、小鼠BDNF在海馬組織CA1、CA3和DG三個區(qū)的表達較弱,BDNF的平均光密度在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著降低(p<0.01)。與模型組相比,各試驗藥物組DNF在海馬組織CA1和DG兩個區(qū)的表達顯著增強,BDNF的平均光密度在CA1和DG兩個區(qū)均顯著升高(p<0.01)。氟西汀組(20mg/kg)和枸杞籽油高劑量組在海馬組織CA1、CA3和DG三個區(qū)的表達均顯著增強。BDNF的平均光密度在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著升高(p

13、<0.01)。
  b.p-CREB:與正常組相比,模型組小鼠p-CREB在海馬CA1、CA3和DG三個區(qū)的表達較弱。p-CREB的平均光密度在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著降低(p<0.05、p<0.01),與模型組相比,除枸杞籽油中劑量組小鼠p-CREB只在海馬CA1區(qū)表達顯著增強;光密度顯著升高(p<0.01)外。其余各實驗組小鼠p-CREB海馬CA1、CA3和DG三個區(qū)的表達均顯著增強,平均光密度在CA1、CA3和DG三

14、個區(qū)均顯著升高(p<0.01)。
  c.CREB磷酸化比率:與正常組相比,模型組小鼠CREB磷酸化比率在海馬CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著低于正常組。p-CREB/CREB在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著低于正常組(p<0.01、p<0.05)。與模型組相比,除枸杞籽油中劑量組小鼠CREB磷酸化比率只在海馬CA1區(qū)顯著上升;p-CREB/CREB顯著升高(p<0.01)外。其余各實驗組小鼠磷酸化比率在海馬CA1、CA3和DG

15、三個區(qū)均顯著上升,p-CREB/CREB在CA1、CA3和DG三個區(qū)均顯著升高(p<0.01)。
  6.Western blot結(jié)果
  a.BDNF:與正常組相比,模型組小鼠海馬組織BDNF表達量顯著降低(p<0.05);與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠海馬組織BDNF表達量顯著升高(p<0.01)。
  b.p-CREB:與正常組相比,模型組小鼠海馬組織p-CREB表達量與正常組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異;與模

16、型組相比,枸杞籽油高劑量組小鼠海馬組織p-CREB表達量顯著升高(p<0.05);氟西汀組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
  c.CREB:與正常組相比,模型組小鼠海馬組織CREB表達量與正常組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異;與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油高劑量組小鼠海馬組織CREB表達量均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
  d.CREB磷酸化比率:與正常組相比,模型組小鼠海馬組織中的CREB磷酸化比率顯著降低(p<0.05)。與模型組相比,氟西汀組和枸杞籽油

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