全氟辛烷磺酸對大鼠海馬細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響.pdf

1、目的： 全氟辛烷磺酸是全氟碳化物中的重要化合物之一。 毒理學實驗證實了PFOS對實驗動物具有發(fā)育毒性、免疫毒性、生殖毒性和潛在致癌性。但目前關(guān)于PFOS材料引起的神經(jīng)毒性評價資料還很少。本研究從腦與血清中PFOS濃度與中樞神經(jīng)損傷的相關(guān)性、PFOS對中樞神經(jīng)神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的影響等方面，探討PFOS對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的可能影響機制，進而為PFOS的安全性評價提供科學依據(jù)。 材料與方法： 1、動物染毒

2、方案 (1)PFOS-飼料配制：配制2％Tween 80溶液，按照設(shè)計劑量加入全氟辛烷磺酸鉀(PFOS-K)配制PFOS溶液。霍恩法計算PFOS溶液經(jīng)消化道LD<,50>。將溶液按照設(shè)計劑量加入大鼠粉碎型飼料中，烘干待用。 (2)動物分組及染毒：雄性Wistar大鼠50只，體重180-220g，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后按體重隨機分為5組，每組10只。動物室溫度18℃-23℃，相對濕度45％-55％。實驗組PFOS染毒劑量分別為2

3、、8、32、128 mg·kg<'-1>(feed)，對照組給予2％Tween-80處理后干飼料，實驗組給予設(shè)計劑量的PFOS處理飼料，自由進食水。連續(xù)染毒60天。染毒結(jié)束后，腹腔注射0.4％(w/v)戊巴比妥鈉麻醉大鼠。取腦，剝離海馬組織。取血清及剩余腦組織，-80℃冷凍保存。 2、觀察指標與檢測方法 (1)染毒大鼠體重及絕對飼料消耗量記錄； (2)染毒大鼠超聲刺激記錄； (3)血清及腦組織樣品中PFO

4、S濃度的測定-固相萃取-高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)機法(HPLC/MS-MIS)； (4)海馬細胞內(nèi)鈣離子濃度測定-Fura-2/AM熒光探針法； (5)腦皮質(zhì)、海馬、小腦細胞病理學觀察-尼氏染色法； 3、統(tǒng)計分析 全部數(shù)據(jù)分析處理均采用SPSS(13.0)統(tǒng)計軟件。實驗結(jié)果用x±s表示。各試驗組與對照組數(shù)據(jù)之間比較：數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的采用單因素方差分析，不符合的采用秩和檢驗。 試驗結(jié)果：

5、 1、各試驗組染毒大鼠體重及絕對飼料消耗量在相同染毒天數(shù)內(nèi)，大鼠體重增加數(shù)量隨染毒劑量的增加而減少。染毒60天結(jié)束時，32、128 mg·kg<'-1>(feed)組大鼠體重顯著低于8 mg·kg<'-1>(feed)組(p<0.05)和對照組大鼠體重(p<0.01)。染毒前30天內(nèi)各劑量組大鼠每增加100g體重的絕對食物消耗量未出現(xiàn)統(tǒng)計學差異(p>0.05)，染毒結(jié)束前30天內(nèi)128mg·kg<'-1>(feed)組大鼠每增加

6、100g體重的絕對食物消耗量顯著低于對照組(p<0.01)。 2、各試驗組大鼠超聲刺激下的驚厥記錄實驗組與對照組之間無顯著性差異(p>0.05)。 3、各試驗組血清及腦組織樣品中PFOS濃度的測定8 mg·kg<'-1>(feed)組及更高染毒組的血清和腦中PFOS濃度均顯著高于對照組(p<0.01)，并與染毒劑量之間呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系(r=0.944，p<0.01)。2 mg·kg<'-1>(feed)組血清中PFOS濃度

7、顯著高于對照組(p<0.05)。PFOS 8 mg·kg<'-1>(feed)染毒組的血清和腦中PFOS濃度與2 mg·kg<'-1>(feed)染毒組水平之間無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 4、海馬細胞內(nèi)鈣離子濃度PFOS 2、8、32、128 mg·kg<'-1>(feed)染毒組海馬細胞[Ca<'2+>]i分別為222.27±9.67nmol·L<'-1>、244.29±9.07 nmol·L<'-1>、381.69±9.

8、61 nmol·L<'-1>和528.27±15.51nmol·L<'-1>，與對照組[(141.30±2.70)nmol·L<'-1>]比較具有顯著性差異(P<0.01)，并且海馬細胞[Ca<'2+>]i與PFOS染毒劑量成正相關(guān)(r=0.929，p<0.05)。大鼠血清中PFOS濃度與腦中PFOS濃度(r=0.801，p<0.01)、腦中PFOS濃度與海馬細胞[Ca<'2+>]i(r=0.811，p<0.01)以及血清中PFOS濃度

9、與海馬細胞[Ca<'2+>]i(r=0.955，p<0.01)，均呈現(xiàn)顯著的正相關(guān)關(guān)系。 5、大鼠腦皮質(zhì)、海馬和小腦細胞的尼氏染色對照組大鼠大腦皮質(zhì)中外顆粒層和錐體細胞層中的錐體細胞、海馬CA1區(qū)M段錐體細胞和小腦Purkinji細胞胞漿勻質(zhì)，胞核大而圓，位于細胞中央。尼氏小體呈紫色，部分細胞核仁清晰可見，核突明顯。各染毒組大鼠腦切片中未見尼氏體斑塊染色變淺等病理性改變。 結(jié)論： 1、PFOS消化道亞慢性染毒可以