全氟辛烷磺酸對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和發(fā)育調(diào)控基因的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察PFOS對(duì)E15大鼠大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞增殖和發(fā)育調(diào)控基因Notch1、Sox2、Stat3和P21表達(dá)的影響，探討PFOS影響皮層神經(jīng)干細(xì)胞增殖機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、分離E15天SD大鼠皮層進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。以（1-2）*106/ml細(xì)胞密度接種，在含有2％ B27，20ng/ml bFGF,20ng/ml EGF的DMEM/F12的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并穩(wěn)定傳至第三代。用nestin

2、細(xì)胞免疫化學(xué)染色法鑒定神經(jīng)干細(xì)胞。
　　 2、將原代培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞隨機(jī)分為5組:空白組（C組），溶劑對(duì)照組(D組)，10μM PFOS組（P1組），50μM PFOS組(P2組)，100μM PFOS組(P3組)。D組中加入DMSO，P1，P2，P3中各加入10μM，50μM，100μM PFOS，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
　　 3、增殖實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)20小時(shí)后，加入10μM的EDU，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后進(jìn)行EDU免疫熒光染色。

3、
　　 4、培養(yǎng)24小時(shí)后采用熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)法(Real-Time PCR)檢測(cè)各組樣本中Stat3、Notch1、Sox2和P21mRNA的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1、與C組相比，D組與P1組對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖沒(méi)有抑制作用，P2組、P3組對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞均產(chǎn)生抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2、與C組比較，D組、P1組、P2組和P3組的Stat3、Notch1、Sox2和P2