S100A7通過EGF誘導(dǎo)的EGFR-PI3K通路上調(diào)CXCR4的表達.pdf

1、乳腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢,是全球女性最常見的惡性疾病之一。致死原因大多是原發(fā)腫瘤細胞經(jīng)血道或淋巴道轉(zhuǎn)移至遠處器官[1]。其發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移的分子機制尚未完全闡明。
　　 S100蛋白家族是一類脊椎動物中的EF-手相鈣結(jié)合蛋白,至少由20種成員組成。Psoriasin(S100A7)是S100蛋白家族的一員,在細胞中參與調(diào)節(jié)蛋白磷酸化、細胞骨架和轉(zhuǎn)錄因子的組成以及細胞增生和分化。參與神經(jīng)細胞分化,星形細胞增殖,炎性細胞趨化等[

2、2-4]。
　　 S100A7主要定位于表皮角質(zhì)形成細胞[5]。有研究表明S100A7在多種腫瘤中表達,包括皮膚的鱗狀細胞癌[6,7]、肺癌[8]、宮頸癌和膀胱癌[9]及乳腺癌[10]等。且S100A7持續(xù)表達在浸潤癌中,與預(yù)后不良有關(guān)[11]。Leygue等在研究Psoriasin(S100A7)mRNA的表達水平時發(fā)現(xiàn),在正常、良性和不典型增生的乳腺導(dǎo)管中幾乎不表達,而在導(dǎo)管內(nèi)原位癌(DCIS)的導(dǎo)管上皮細胞中高度表達[12

3、]。目前研究S100A7在肺癌腦轉(zhuǎn)移組織中高表達提示S100A7與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān),小鼠模型實驗顯示S100A7與腫瘤的侵襲和血管形成有關(guān)[13]。最近Vikram Paruchuri等研究表明S100A7在EGF的誘導(dǎo)下參與激活EGFR信號通路[14]。
　　 CXCR4是一個跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體,是CXCL12的受體,屬于CXC家族趨化因子,兩者具有高度的特異性和親和力[15,16]。已有的研究表明,CXCL12/CXCR4具有

4、介導(dǎo)免疫及炎癥反應(yīng),調(diào)控造血干細胞遷移及歸巢,參與胚胎發(fā)育過程[17-19]；此外,近年研究還發(fā)現(xiàn)CXCR4在卵巢癌[20]、前列腺癌[21]、膀胱癌[22]等多種腫瘤中高表達,并在腫瘤侵襲、遷移中發(fā)揮重要作用[23,24]。參與激活PI-3K(磷脂酰肌醇-3激酶)、MAPK(絲裂原活化蛋白激酶)和NF-K B信號通路[25-30]。有文獻報道SHIP2(磷酸肌醇磷酸酯酶)可以通過EGFR-AKT通路上調(diào)CXCR4的表達和細胞的遷移[3

5、1]。目前S100A7與CXCR4之間關(guān)系尚不清。
　　 我們將采用免疫組化、轉(zhuǎn)染、Western blot、Transwell、劃痕實驗等方法初步探討S100A7與CXCR4的表達情況及相關(guān)性,S100A7與ER及HER2、血管密度的關(guān)系；CXCR4.與ER及HER2、血管密度的關(guān)系。S100A7與CXCR4如何調(diào)控,和對乳腺癌細胞生物學(xué)行為的影響。
　　 材料與方法：
　　 1.應(yīng)用免疫組化方法檢測S100A

6、7與CXCR4及CD34在正常乳腺和226例乳腺癌組織中的表達及相關(guān)性。
　　 2.用Western blot方法檢測乳腺癌穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系S 100A7+MDA-MB-231和Vector+MDA-MB-231中CXCR4和EGFR/P13K通路中蛋白的變化。
　　 3.細胞劃痕實驗和Transwell實驗檢測在EGF的誘導(dǎo)下S100A7對細胞功能的影響。
　　 4.應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件,x2檢驗,相關(guān)性

7、采用spearman等級相關(guān)分析；對計量資料,所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準差(x±s)表示,兩樣本均數(shù)比較先進行,方差齊性檢驗,方差齊則采用成組設(shè)計資料兩樣本均數(shù)比較的t檢驗；P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 一、免疫組化方法檢測S100A7與CXCR4及CD34在乳腺癌中的表達情況及相關(guān)性
　　 1、S100A7在20例正常乳腺組織中低表達或幾乎不表達,(如圖1、2)；CXCR4在20例正常乳腺組織中不

8、表達。
　　 2、S100A7在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中細胞漿與細胞核表達。CXCR4在細胞漿和細胞核均有表達。
　　 3、S100A7在ER(-)組中陽性表達率明顯高于ER(+)組中的陽性表達率。S100A7與ER負相關(guān)。在ER(-)組中,ER(-)PR(-)HER2(+)組比ER(-)PR(-)HER2(-)組的陽性表達率高,陽性率分別為62.2％和42.5％。在ER(+)PR(+)HER2(+)組的陽性率高于ER(+)P

9、R(+)HER2(-)的陽性率,陽性率分別為27.2％和15.6％。S100A7與HER2正相關(guān)。
　　 4、CXCR4在ER(-)組中陽性表達率略高于ER(+)組中的陽性表達率。但無統(tǒng)計學(xué)意義。在ER(-)組中,ER(-)PR(-)HER2(+)組比ER(-)PR(-)HER2(-)組的陽性表達率高,陽性率分別為79.2％和61.1％。CXCR4在ER(+)PR(+)HER2(+)中的陽性率高于ER(+)PR(+)HER2(-

10、)組的陽性率,陽性率分別為78.2％和61％。CXCR4與HER2正相關(guān)。
　　 5、CXCR4的表達與S100A7表達存在正相關(guān)性。(r=0.433,p<0.05)。
　　 6、S100A7與CXCR4在乳腺癌中均與血管密度成正相關(guān)。
　　 二、Western blot方法檢測乳腺癌細胞EGF剛P13K通路蛋白的情況
　　 1、S100A7穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞中CXCR4表達高于對照組,提示S100A7上調(diào)CXCR

11、4的表達。
　　 2、EGF誘導(dǎo)S100A7激活EGFR/P13K信號通路:通路下游信號分子磷酸化水平Phospho-EGFR和Phospho-IRS-1表達水平明顯比對照組中表達增強。
　　 三、對乳腺癌細胞生物學(xué)功能的影響
　　 1、細胞劃痕實驗顯示在EGF誘導(dǎo)下S100A7增強促進細胞遷移。
　　 2、Transwell實驗顯示在EGF誘導(dǎo)下S100A7增強促進細胞遷移。
　　 結(jié)論：

12、>　　 1、在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中S100A7與ER、PR負相關(guān):S100A7與HER2正相關(guān)；
　　 2、CXCR4與HER2正相關(guān)；
　　 3、CXCR4與100A7在乳腺癌中成正相關(guān)。S100A7與CXCR4均與血管密度成正相關(guān)；提示S100A7與CXCR4在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。
　　 4、在乳腺癌細胞系中,在EGF的誘導(dǎo)下,S100A7能通過EGFR/PDK信號通路上調(diào)CXCR4的表達,從而增