EGFR-PI3K信號通路調(diào)控卵巢癌細(xì)胞株增殖轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的: 研究TGF-α和PI3K抑制劑對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及相關(guān)信號分子、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的變化，探討EGFR/PI3K信號通路在卵巢癌增殖轉(zhuǎn)移中的作用機制。 材料與方法： 1.用MTT法、WST法分別檢測TGF-α和PI3K抑制劑（Wortmanin）對人卵巢癌細(xì)胞株CAOV3、HO8910PM增殖力的改變。 2.采用Westernblot方法檢測TGF-α作用后人卵巢癌CAOV3細(xì)胞株EGFR、ERK1/

2、2、PI3K、AKT、P70S6K等信號分子蛋白水平表達(dá)量的變化。 3.用RT-PCR技術(shù)檢測PI3K抑制劑（Wortmanin）預(yù)處理后，EGFR、PI3K等信號分子及MMP9、Snail等轉(zhuǎn)移相關(guān)基因mRNA水平表達(dá)量的變化。 4.用BOYDEN小室體外侵襲實驗分別檢測TGF-α、PI3K抑制劑對卵巢癌細(xì)胞株侵襲能力的影響。 結(jié)果： 1.外源性TGF-α對卵巢癌細(xì)胞株CAOV-3有明顯的促進(jìn)增殖作用，

3、呈時間效應(yīng)關(guān)系；在0.5-25ng/ml范圍內(nèi)，細(xì)胞增殖率與TGF-α濃度成劑量效應(yīng)關(guān)系。外源性TGF－α對高轉(zhuǎn)移性卵巢癌細(xì)胞株HO8910PM亦有明顯的促進(jìn)增殖作用（P＜0.01）；不同濃度的PI3K抑制劑Wortmanin預(yù)處理2小時即能抑制TGF－α誘導(dǎo)的促增殖作用，分別使24小時細(xì)胞增殖率下降了23％、26％、35％、39％（P＜0.01）；但Wortmanin對TGF－α的抑制作用是可逆的，48小時細(xì)胞生長抑制作用解除（p＞0

4、.05）。 2.外源性TGF-α刺激CAOV-3細(xì)胞，EGFR、PI3K、AKT、P70S6K等信號分子的蛋白水平表達(dá)量分別在不同的作用時間點上升（P＜0.01），ERK1/2蛋白水平表達(dá)量無明顯改變（P＞0.05）。 3. 在外源性TGF－α刺激下，HO8910PM細(xì)胞內(nèi)EGFR和PI3K 基因mRNA水平表達(dá)量顯著上調(diào)（P＜0.01）；不同濃度的Wortmanin預(yù)處理組與TGF－α組比較，EGFR基因mRNA水平表

5、達(dá)量無明顯改變（P＞0.05），PI3K基因mRNA水平表達(dá)量分別下降69.2％，89.8％，94.8％；在外源性TGF－α刺激下，HO8910PM細(xì)胞內(nèi)SNAIL、MMP9基因 mRNA表達(dá)量分別由0.407±0.005、0.084±0.006上調(diào)為0.461±0.005、0.406±0.018；不同濃度的PI3K抑制劑Wortmanin預(yù)處理2小時可抑制TGF－α誘導(dǎo)的SNAIL、MMP9 基因mRNA水平表達(dá)量上調(diào)(P＜0.05)

6、，抑制率分別為71.6％、96.1％、98.7％和43.6％、58.9％、95.5％。 4. TGF－α能顯著提高Caov-3 細(xì)胞的體外侵襲力，過膜細(xì)胞數(shù)由對照組的38.28±11.83個提高到TGF-α組的73.39±12.55個（P<0.01）；TGF－α亦能顯著提高HO8910PM細(xì)胞的體外侵襲力過膜細(xì)胞數(shù)由空白對照組的215±8.10個增至TGF-α組的275±11.75個（P<0.01）；PI3K抑制劑Wortman