CXCR4通過調(diào)控PI3K通路活性對大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞生物功能影響機制的研究.pdf

1、目的：研究CXCR4通過調(diào)控PI3K通路活性對大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的生物功能學(xué)影響的機制
　　方法：⑴構(gòu)建CXCR4過表達rAAV6病毒載體;感染SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞;運用RT-PCR方法、Western Blot方法檢測SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞中CXCR4的表達水平；⑵運用CCK8實驗評價CXCR4過表達對缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖能力的影響;運用流式細(xì)胞術(shù)評價CXCR4過表達對缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡情

2、況的影響;運用運用Transwell遷移實驗評價CXCR4過表達對缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移能力的影響；⑶運用Western Blot方法檢測缺氧預(yù)處理/CXCR4過表達對BM-EPCs的PI3K/Akt信號通路表達的影響；⑷運用CCK8實驗評價LY294002（PI3K抑制劑）對CXCR4過表達的缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖能力的影響;運用流式細(xì)胞術(shù)評價LY294002對CXCR4過表達的缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓

3、內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡情況的影響;運用Transwell遷移實驗評價LY294002對CXCR4過表達的缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果：①CXCR4過表達組的內(nèi)皮祖細(xì)胞中CXCR4核酸、蛋白的表達均高于空載體對照組(p＜0.01)；②CCK8實驗、Transwell遷移實驗、流式細(xì)胞術(shù)分別得出缺氧預(yù)處理對BM-EPCs具有抑制增殖(p＜0.05)、遷移(確定單一變量，各自兩組間的遷移細(xì)胞數(shù)具有統(tǒng)計學(xué)差異，p＜

4、0.01)，增加凋亡（確定單一變量，各自兩組間的凋亡百分比具有統(tǒng)計學(xué)意義，p＜0.01）; CCK8實驗、Transwell遷移實驗、流式細(xì)胞術(shù)分別證實了CXCR4過表達對缺氧預(yù)處理的BM-EPCs具有促進其增殖（確定單一變量，各自兩組間的OD值具有統(tǒng)計學(xué)差異，p＜0.05）、遷移確定單一變量，各自兩組間的遷移細(xì)胞數(shù)具有統(tǒng)計學(xué)差異，p＜0.01)的作用，抑制其凋亡(確定單一變量，各自兩組間的凋亡百分比具有統(tǒng)計學(xué)意義，p＜0.01)；③W

5、estern Blot結(jié)果顯示缺氧預(yù)處理可下調(diào)BM-EPCs的CXCR4/PI3K/Akt表達;CXCR4過表達可上調(diào)經(jīng)缺氧預(yù)處理的BM-EPCs的CXCR4/PI3K/Akt表達；④CCK8實驗、Transwell遷移實驗、流式細(xì)胞術(shù)分別證實了LY294002可消除CXCR4過表達對缺氧預(yù)處理的BM-EPCs增殖能力增強的作用（各自兩組間的OD值具有統(tǒng)計學(xué)差異，p＜0.05）、消除CXCR4過表達對缺氧預(yù)處理的BM-EPCs遷移能力增