CXCR4通過調控PI3K通路活性對大鼠骨髓內皮祖細胞生物功能影響機制的研究.pdf

1、目的：研究CXCR4通過調控PI3K通路活性對大鼠骨髓內皮祖細胞的生物功能學影響的機制
　　方法：⑴構建CXCR4過表達rAAV6病毒載體;感染SD大鼠骨髓內皮祖細胞;運用RT-PCR方法、Western Blot方法檢測SD大鼠骨髓內皮祖細胞中CXCR4的表達水平；⑵運用CCK8實驗評價CXCR4過表達對缺氧預處理的SD大鼠骨髓內皮祖細胞增殖能力的影響;運用流式細胞術評價CXCR4過表達對缺氧預處理的SD大鼠骨髓內皮祖細胞凋亡情

2、況的影響;運用運用Transwell遷移實驗評價CXCR4過表達對缺氧預處理的SD大鼠骨髓內皮祖細胞遷移能力的影響；⑶運用Western Blot方法檢測缺氧預處理/CXCR4過表達對BM-EPCs的PI3K/Akt信號通路表達的影響；⑷運用CCK8實驗評價LY294002（PI3K抑制劑）對CXCR4過表達的缺氧預處理的SD大鼠骨髓內皮祖細胞增殖能力的影響;運用流式細胞術評價LY294002對CXCR4過表達的缺氧預處理的SD大鼠骨髓

3、內皮祖細胞凋亡情況的影響;運用Transwell遷移實驗評價LY294002對CXCR4過表達的缺氧預處理的SD大鼠骨髓內皮祖細胞遷移能力的影響。
　　結果：①CXCR4過表達組的內皮祖細胞中CXCR4核酸、蛋白的表達均高于空載體對照組(p＜0.01)；②CCK8實驗、Transwell遷移實驗、流式細胞術分別得出缺氧預處理對BM-EPCs具有抑制增殖(p＜0.05)、遷移(確定單一變量，各自兩組間的遷移細胞數(shù)具有統(tǒng)計學差異，p＜

4、0.01)，增加凋亡（確定單一變量，各自兩組間的凋亡百分比具有統(tǒng)計學意義，p＜0.01）; CCK8實驗、Transwell遷移實驗、流式細胞術分別證實了CXCR4過表達對缺氧預處理的BM-EPCs具有促進其增殖（確定單一變量，各自兩組間的OD值具有統(tǒng)計學差異，p＜0.05）、遷移確定單一變量，各自兩組間的遷移細胞數(shù)具有統(tǒng)計學差異，p＜0.01)的作用，抑制其凋亡(確定單一變量，各自兩組間的凋亡百分比具有統(tǒng)計學意義，p＜0.01)；③W

5、estern Blot結果顯示缺氧預處理可下調BM-EPCs的CXCR4/PI3K/Akt表達;CXCR4過表達可上調經(jīng)缺氧預處理的BM-EPCs的CXCR4/PI3K/Akt表達；④CCK8實驗、Transwell遷移實驗、流式細胞術分別證實了LY294002可消除CXCR4過表達對缺氧預處理的BM-EPCs增殖能力增強的作用（各自兩組間的OD值具有統(tǒng)計學差異，p＜0.05）、消除CXCR4過表達對缺氧預處理的BM-EPCs遷移能力增