緊密連接蛋白Claudin-4和ZO-1在火把花根保護(hù)油酸肺損傷肺通透性屏障中的機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過觀察油酸致急性肺損傷大鼠肺組織緊密連接蛋白Claudin-4和ZO-1表達(dá)的變化及其與肺通透性屏障指標(biāo)的關(guān)系，探討火把花根對緊密連接蛋白Claudin-4和ZO-1表達(dá)的影響和其可能機(jī)制，為臨床上使用火把花根治療急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合癥(ALI/ARDS)提供治療策略和理論依據(jù)。
　　方法：健康SD大鼠45只按照隨機(jī)對照原則分成正常對照組、急性肺損傷組(ALI組)和火把花根預(yù)防組，每組各15只。正常對照組：2ml生

2、理鹽水連續(xù)灌胃10天，每天2次，第10天灌胃后1h尾靜脈注射生理鹽水0.04ml/kg；ALI組：2ml生理鹽水連續(xù)灌胃10天，每天2次，第10天灌胃后1h尾靜脈注射油酸(0.04ml/kg)，復(fù)制大鼠ALI模型；火把花根預(yù)防組：火把花根片研磨后溶于2ml生理鹽水中，連續(xù)灌胃10天(600mg/kg·day)，每天2次，第10天灌胃后1h注射油酸；注射后4h采集大鼠肺組織，測定大鼠肺組織濕/干重比(W/D)；采集大鼠靜脈血血清、支氣管肺

3、泡灌洗液(BALF)，采用雙縮脲法測定肺通透指數(shù)(LPI)；肺組織固定包埋，行蘇木精-伊紅(HE)染色進(jìn)行肺損傷評分(LIS)；采用免疫組織化學(xué)法測定緊密連接蛋白Claudin-4和ZO-1的表達(dá)及定位，觀察急性肺損傷后上述蛋白含量的變化及火把花根對上述蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：大體觀察正常對照組肺組織未見明顯異常；ALI組肺組織腫脹，表面廣布出血點；火把花根預(yù)防組肺組織輕度腫脹。光鏡下觀察正常對照組肺泡上皮組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔

4、及肺間質(zhì)未見明顯病理改變；ALI組肺泡壁欠完整，肺間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張，肺泡腔內(nèi)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤，紅細(xì)胞滲出，肺泡間質(zhì)明顯水腫；火把花根組改變較 ALI組明顯減輕。ALI組LIS較正常對照組明顯升高(P<0.01)，火把花根組LIS明顯低于ALI組(P<0.01)，但仍高于正常對照組(P<0.05)。ALI組W/D和LPI分別較正常對照組、火把花根組明顯升高(P<0.05)，火把花根組 W/D高于正常對照組(P<0.01)，但火把花根組

5、LPI與正常對照組無明顯差異。緊密連接蛋白Claudin-4在正常對照組大鼠肺泡上皮細(xì)胞胞膜表達(dá)，胞漿也有少量表達(dá)。急性肺損傷組累積光密度值(IOD)顯著低于正常對照組及火把花根組(P<0.01)，火把花根組IOD值較正常對照組升高(P<0.05)。ZO-1在正常對照組大鼠肺泡上皮細(xì)胞胞漿大量表達(dá)。急性肺損傷組IOD值明顯低于正常對照組及火把花根組IOD值(P<0.01)，火把花根組IOD值較正常對照組升高(P<0.05)。