ETEC對斷奶腹瀉仔豬胃腸道緊密連接蛋白ZO-1的影響.pdf

1、仔豬早期斷奶技術是國內外集約化和規(guī)?；B(yǎng)豬生產中普遍關注和采用的先進技術。仔豬在斷奶前后胃腸道微生物區(qū)系發(fā)生了很大變化。目前研究認為仔豬早期斷奶后產生腹瀉這一臨床癥狀的主要原因是幼齡仔豬消化道組織及其功能發(fā)育尚未完全成熟，斷奶應激易導致仔豬胃腸道功能紊亂，使仔豬胃、腸道屏障受損，從而導致仔豬“斷奶綜合征”的發(fā)生。研究表明：腸黏膜上皮的完整性是仔豬早期斷奶綜合征發(fā)生的關鍵。腸黏膜屏障包括完整的腸上皮細胞及其細胞間連接所構成的機械屏障、腸道

2、正常微生物群所構成的生物屏障和腸道相關淋巴樣組織及其分泌抗體所構成的免疫屏障。緊密連接是腸上皮細胞間的主要連接方式，對維持上皮細胞極性、調節(jié)腸屏障的通透性、防止細菌、內毒素和毒性大分子物質進入體內發(fā)揮著重要作用。ZO-1是組織緊密連接的重要組成成分，其表達上調可調節(jié)組織的通透性。因此，在分子生物學水平上檢測ZO-1的變化對研究斷奶仔豬腹瀉的機理具有重要的意義，同時可以降低仔豬斷奶綜合征的發(fā)病率。
　　 研究目的：建立起PCR反應

3、體系，可以同時檢測LT、ST-Ⅰ和ST-Ⅱ三種大腸桿菌毒力因子。檢測緊密連接蛋白ZO-1在斷奶仔豬ETEC性腹瀉時胃腸道組織中的分布及表達水平及意義。
　　 實驗方法：本實驗選取24頭斷奶仔豬，攻入ETEC，分別取1d、3d、Sd、7d的胃黏膜、回腸及結腸組織，采用半定量PCR法摸索反應適合的條件，實時熒光定量PCR的方法檢測胃腸道緊密連接蛋白ZO-1以及內參基因GAPDH的mRNA豐度；采用Western blotting的方

4、法檢測胃腸道緊密連接蛋白ZO-1的蛋白表達量。
　　 實驗結果：成功地建立了ETEC腸毒素三種毒力因子LT、ST-Ⅰ和ST-Ⅱ的PCR分子生物學檢測方法，為研究ETEC性斷奶仔豬腹瀉提供了科學的理論依據。實時熒光定量PCR結果表明：ZO-1 mRNA的表達水平與組織的分化水平有關，隨著斷奶仔豬腹瀉程度的加重，ZO-1的表達率也隨之下降。胃腸道緊密連接蛋白ZO-1在三種組織中均有表達，可見在攻入ETEC后5d、7d表達量差異極其明

5、顯，且其表達量隨著腹瀉時間的延長逐漸呈降低趨勢；Western blotting結果表明：ZO-1蛋白表達量逐漸降低，表達水平明顯低于內參基因的表達量。
　　 分析總結：通過本實驗成功的揭示了腸屏障功能調控的部分分子機制，對于提升該領域的基礎科學理論水平具有重要的臨床實踐意義，而且為斷奶仔豬生產提供了技術研究平臺，為營養(yǎng)調控仔豬腸道結構與功能提供了一些理論依據，為防治“仔豬早期斷奶綜合征”，提高仔豬成活率開辟出了一條新思路，從而