口服卡介苗多糖核酸治療哮喘大鼠免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的:
　　建立大鼠慢性哮喘模型的基礎(chǔ)上觀察口服卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)干預(yù)后哮喘大鼠氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性、脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)目、外周血清中IL-4和IFN-γ含量及腸粘膜sIgA含量的變化，探討口服BCG-PSN防治哮喘的可行性及免疫調(diào)節(jié)作用。
　　方法:
　　1.取雄性成年SD大鼠（體重160±20g）50只，分為五組:對(duì)照(Control)組、模型(Model)組、口服卡介苗(BCG)

2、組、口服BCG-PSN組即BCG-PSN(A)組和肌注BCG-PSN組即BCG-PSN(B)組，各組10只。
　　2.除Control組以外的其余四組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)第1天和第15天腹腔注射10％OVA混合液1ml（含OVA100mg、氫氧化鋁100mg）致敏。第21天后再進(jìn)行激發(fā)，2％OVA2ml泵霧化吸入，每周3次，激發(fā)連續(xù)9周，構(gòu)建大鼠慢性哮喘模型，Control組致敏和激發(fā)均以生理鹽水代替。
　　3.藥物干預(yù)從實(shí)驗(yàn)的第

3、1天起開始，BCG組予BCG灌胃（50ug/次，2次/周，12周）;BCG-PSN(A)組予BCG-PSN灌胃（250ug/kg·次，2次/周，12周）;BCG-PSN(B)組予BCG-PSN肌注（45ug/kg·次，2次/周，12周）。
　　4.末次激發(fā)24小時(shí)內(nèi)麻醉動(dòng)物，氣管插管后行氣道高反應(yīng)性(airway hyper responsiveness，AHR)檢測;制備脾細(xì)胞懸液，通過流式細(xì)胞學(xué)檢測脾臟CD4+CD25+Tre

4、g細(xì)胞數(shù)目變化，了解BCG-PSN對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響;采用ELISA法檢測外周血清中IFN-γ和IL-4及腸道粘膜sIgA的含量，明確口服BCG-PSN對(duì)TH1/TH2細(xì)胞因子平衡及局部黏膜免疫的調(diào)節(jié)情況;腹主動(dòng)脈放血處死大鼠，取各組動(dòng)物BALF測定炎性細(xì)胞總數(shù)和EOS百分比，并行肺臟組織病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠慢性哮喘模型的建立:與Control組相比，在激發(fā)過程中，Model組大鼠逐漸出現(xiàn)煩躁不安、呼吸急

5、促、撓鼻、發(fā)紺、活動(dòng)進(jìn)食減少或俯臥不動(dòng)、出現(xiàn)豎毛、毛發(fā)失去光澤甚至脫毛、反應(yīng)遲滯等哮喘樣表現(xiàn);同時(shí)Model組大鼠動(dòng)物氣道高反應(yīng)性測定顯示氣道阻力明顯增高，與Control組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且肺組織病理顯示:Model組氣道周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤，支氣管管壁增厚、管腔狹窄，氣道上皮細(xì)胞脫落，粘液分泌明顯增加。BALF細(xì)胞學(xué)顯示炎性細(xì)胞總數(shù)及EOS百分比與Control組比較明顯增加（P＜0.05），提示哮喘大鼠模

6、型復(fù)制成功。
　　2.各組大鼠氣道高反應(yīng)性值變化:各組大鼠用鹽酸組胺激發(fā)，鹽酸組胺濃度從0.32mg/ml起，Model組、BCG組、BCG-PSN(A)組和BCG-PSN(B)組氣道阻力均明顯高于Control組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而組胺濃度從0.64mg/ml起，BCG-PSN(A)組氣道阻力明顯低于Model組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但明顯高于BCG-PSN(B)組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義，而與BCG組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.各組大鼠病理組織學(xué)變化:Model組氣道周圍炎癥改變明顯、支氣管管壁增厚、管腔狹窄，氣道上皮細(xì)胞脫落，粘液分泌明顯增加。BCG-PSN(A)組、BCG組及BCG-PSN(B)組與Model組相比，氣道周圍炎癥明顯減輕，氣道周圍炎癥細(xì)胞浸潤、氣道分泌物減少、支氣管壁增厚及上皮細(xì)胞脫落現(xiàn)象明顯改善。
　　4.BALF細(xì)胞學(xué)變化:BCG-PSN(A)組炎性細(xì)胞總數(shù)及E

8、OS百分比明顯低于Model組（P＜0.05），但明顯高于BCG-PSN(B)組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而與BCG組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.外周血清中IFN-γ、IL-4含量:致敏、激發(fā)后Model組血清中IL-4的含量較Control組明顯升高（P＜0.05），IFN-γ的含量較Control組顯著降低(P＜0.05);BCG-PSN(A)組IL-4含量明顯低于Model組(P＜0.05)，而

9、IFN-γ的含量明顯高于Model組(P＜0.05);BCG-PSN(A)組IFN-γ含量明顯低于BCG-PSN(B)組(P＜0.05)，而與BCG組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而BCG-PSN(A)組、BCG組與BCG-PSN(B)組三者之間血清IL-4的含量兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.脾臟CD4+CD25+Treg/CD4+T細(xì)胞百分比:致敏、激發(fā)后Model組脾臟CD4+CD25+Treg/

10、CD4+T細(xì)胞百分比較Control組明顯降低（P＜0.05）;BCG-PSN(A)組明顯高于Model組(P＜0.05)，但顯著低于BCG-PSN(A)組（P＜0.05），與BCG組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　7.腸粘膜sIgA含量:Control組、Model組、BCG組、BCG-PSN(A)組和BCG-PSN(B)組相互之間sIgA含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.OVA

11、致敏，激發(fā)能夠成功構(gòu)建大鼠慢性哮喘模型。
　　2.口服BCG-PSN能夠降低哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性，部分抑制氣道炎癥、抑制EOS的募集。
　　3.口服BCG-PSN能升高血清中IFN-γ含量，降低血清中IL-4的含量，可調(diào)節(jié)TH1/TH2平衡;哮喘大鼠脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)目下降，口服BCG-PSN干預(yù)CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)目上升。
　　4.口服BCG-PSN與肌注BCG-PSN在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫方面