白僵菌液體深層培養(yǎng)的研究.pdf

1、本文對(duì)白僵菌的液體深層培養(yǎng)進(jìn)行研究，并用液生分生孢子對(duì)馬尾松毛蟲進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，且與白僵菌的氣生分生孢子作對(duì)比，以期找到促進(jìn)白僵菌液生分生孢子形成的培養(yǎng)環(huán)境與培養(yǎng)條件，為白僵菌的液體深層發(fā)酵生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。 通過對(duì)6個(gè)不同菌株的球孢白僵菌在25℃，振蕩頻率為130r/min，168h的恒溫?fù)u床中液體培養(yǎng)，結(jié)果表明：白僵菌Bb<,187>、Bb<,13>、Bb<,03>液生分生孢子數(shù)相對(duì)比于其他三個(gè)菌株較高，而且高峰期為108

2、h-144h，且120h時(shí)達(dá)到最高值。芽生孢子也是Bb<,187>、Bb<,13>、Bb<,03>的孢子數(shù)比另外三個(gè)的高得多，且高峰期為48h-120h。6個(gè)菌株的生物量中，Bb<,187>的最高，Bb<,13>與Bb<,05>次之，其他三個(gè)差異不大。因此我們選出Bb<,187>和Bb<,13>為下面液體深層培養(yǎng)的主要供試菌種，且液體培養(yǎng)的時(shí)間定為120h。 不同氮源、不同碳源對(duì)白僵菌液生分生孢子的形成具有顯著的影響。花生餅、花

3、生粉、黃豆粉、(NH<,4>)<,2>SO<,4>是較好的氮源。蔗糖和葡萄糖是較好的碳源。對(duì)于芽生孢子的形成，花生餅、黃豆粉和(NH<,4>)<,2>SO<,4>是促進(jìn)產(chǎn)孢的氮源，而碳源則因菌株的不同而有所差異。不同氮源對(duì)生物量的影響有顯著的差異，花生餅具有較高的生物量，而黃豆粉次之。不同碳源中，馬鈴薯淀粉具有較高的生物量。但是，蔗糖與葡萄糖與之差異不大。 氮源和碳源的含量對(duì)白僵菌液體深層培養(yǎng)形成分生孢子有重要的影響。當(dāng)?shù)床蛔?/p>

4、，變化碳源含量時(shí)，碳源為20g/L-35g/L時(shí)能夠產(chǎn)生較多的液生分生孢子，碳源為15g/L-30g/L時(shí)能產(chǎn)生較多的芽生孢子，碳源為35g/L-45g/L時(shí)能夠得到較大生物量。當(dāng)碳源不變，變化氮源含量時(shí)，氮源為10g/L-25g/L時(shí)能夠產(chǎn)生較多的液生分生孢子，同時(shí)也能夠產(chǎn)生較多的芽生孢子，氮源為20g/L-50g/L時(shí)能夠得到較大的生物量。 在培養(yǎng)基中，加入適量的生長(zhǎng)輔助因子，對(duì)液生分生孢子、芽生孢子和生物量均能有效的促進(jìn)生

5、長(zhǎng)。VB6+VB1+VB2和復(fù)合維生素B可產(chǎn)生較高的液生分生孢子，復(fù)雜的維生素成分比單一的維生素更有利于液生分生孢子的形成。VB6+VB1+VB2得到最大的芽生孢子數(shù)，而復(fù)合維生素B次之。VB6+VB1-VC可得最大生物量。 加入不同的微量元素對(duì)白僵菌液體培養(yǎng)有重要的意義。同時(shí)加入六種微量元素能得到液生分生孢子的產(chǎn)孢量最大值。加入單一的微量元素時(shí)，Mo元素更有利于液生分生孢子的形成。而對(duì)于芽生孢子，Mn元素具有重要的作用。加入不

6、同的微量元素對(duì)生物量有重要影響。其中，加入Mo能夠得到最大生物量。同時(shí)加入六種微量元素也能達(dá)到較高的生物量。 溫度對(duì)于分生孢子與生物量的形成有顯著影響，25℃-28℃是液生分生孢子形成的最適溫度范圍，也是芽生孢子產(chǎn)孢量最高的最適溫度范圍，同樣也是能產(chǎn)生最多生物量的溫度范圍。光照對(duì)分生孢子的形成也有較大的影響，半光照是最利于液生分生孢子的形成，全黑暗次之。而芽生孢子的形成則偏向于全黑暗與半光照。至于生物量，半光照的生物量較高，全黑

7、暗次之，全光照的生物量最低?？梢?，全光照不利于分生孢子的形成。 培養(yǎng)液的pH值顯著影響白僵菌的產(chǎn)孢與菌絲生長(zhǎng)。當(dāng)pH值為6.5-7.0時(shí)，最利于液生分生孢子的生長(zhǎng)；當(dāng)pH值為6.0-7.0時(shí)，最利于芽生孢子的生長(zhǎng)：當(dāng)pH值6.0-7.0時(shí)能取得較高的生物量。 不同的裝液量對(duì)于白僵菌液體培養(yǎng)的分生孢子和菌絲的形成具有顯著的影響。當(dāng)裝液量為20ml-50ml時(shí)，液生分生孢子有較高的產(chǎn)孢率，當(dāng)為40ml時(shí)，產(chǎn)孢率最高。當(dāng)裝液量

8、為30ml-50ml時(shí)，芽生孢子有較高的產(chǎn)孢率，其中裝液量為50ml時(shí)，產(chǎn)孢率最高，最利于芽生孢子的生成。當(dāng)裝液量為40ml-60ml時(shí)，最有利于菌絲的生長(zhǎng)，得到較高的生物量。其中當(dāng)裝液量為50ml時(shí)，生物量最高。不同的吐溫含量中，白僵菌的生長(zhǎng)有所差異。在吐溫含量低于0.4％時(shí)液生分生孢子的產(chǎn)孢量較低，0.4％-0.8％時(shí)液生分生孢子的產(chǎn)孢量較高。當(dāng)吐溫含量在0.2％-1.0％時(shí)，芽生孢子的產(chǎn)孢量較大，小于0.2％或者是大于1.0％時(shí)芽