肺泡Ⅱ型上皮細胞自噬體在結核分枝桿菌感染過程中作用的研究.pdf

1、結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTb)，俗稱結核桿菌，是引起結核病的病原菌[1]。其感染機制不僅與巨噬細胞存在密切關系[2-5]，而且，人們開始意識到肺泡上皮細胞在結核分枝桿菌感染中起著重要的作用[6-10]。結核分枝桿菌不僅可以入侵，進入上皮細胞[11]，而且可以在肺泡上皮細胞內復制[12]。
　　肺泡II型上皮細胞是一組具有多種功能的肺泡保護性細胞[13]，在天然免疫過程中發(fā)揮重要的作用[1

2、4]。最近的研究表明，肺泡II型上皮細胞具有殺菌作用[15]，可將入侵的非毒性肺炎克雷伯桿菌、煙曲霉菌等迅速吞噬并殺滅。其免疫機制可能和自噬有關。
　　本研究應用RT-PCR的方法，首先肯定了LC3在mRNA在肺泡II型上皮細胞系A549細胞中的表達。經MTB感染A549后，發(fā)現LC3表達明顯下降。同時，自噬經3-MA抑制的A549細胞感染Mtb后，細胞壞死顯著增加。首次證明了A549細胞感染Mtb自噬受抑，以及自噬對A549細胞

3、的保護作用。
　　為研究自噬體在抵抗結核分枝桿菌過程中的作用，本實驗特設計了針對Atg5序列的RNAi序列，并將其導入到表達載體pSilencer?3.1-H1hygro，經測序鑒定，序列完全正確。然后將測序正確的質粒轉染A549細胞，用WesternBlot檢測轉染效果，結果表明有很好的基因抑制效果。后進一步用該細胞模型驗證自噬體在結核分枝桿菌感染中的作用。實驗結果說明，經RNAi技術干擾Atg5基因后，自噬體LC3Ⅱ的表達水平