彭澤鯽魚新型抗菌肽基因的篩選和研究.pdf

1、抗菌肽是特定基因編碼產(chǎn)生的一類小分子多肽，結(jié)構(gòu)和組成復(fù)雜多樣，是生物天然免疫的重要組成部分。抗菌肽因具有獨特的抗菌機制、廣譜的殺菌作用、高效的抗菌活性以及靶菌株難以產(chǎn)生抗性等優(yōu)點而倍受關(guān)注。近年來抗菌肽的開發(fā)與應(yīng)用已經(jīng)成為研究的熱點。目前，在多個物種(如昆蟲、哺乳動物、兩棲動物等)中都發(fā)現(xiàn)了大量抗菌肽，而淡水魚類中發(fā)現(xiàn)的抗菌肽并不是很多。本實驗的目的是分離和研究新的魚類抗菌肽基因，并對抗菌肽結(jié)構(gòu)、功能和作用機理進行分析，為后續(xù)的新型抗菌

2、肽的設(shè)計和表達奠定基礎(chǔ)。 為得到抗菌肽基因序列，我們先用嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)彭澤鯽魚產(chǎn)生免疫反應(yīng)，并提取魚肝臟的RNA，接著通過DDRT-PCR找到差異條帶，選擇150bp左右的差異條帶進行擴增并測序，然后根據(jù)測序結(jié)果設(shè)計引物用RACE的方法找到差異片段所在基因的全長。 我們用2條錨定引物和8條隨機引物組合進行DDRT-PCR，找到多條差異條帶，選取了最有可能的條帶進行測序，最后得到了4條序列(CF-11、CF-2、CF-3