轉(zhuǎn)抗菌肽基因泡桐微生態(tài)安全研究.pdf

1、該論文主要進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因泡桐的微生態(tài)安全研究,為轉(zhuǎn)基因泡制的田間釋放提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),主要由方法的建立和應(yīng)用方法進(jìn)行系統(tǒng)研究兩部分組成.在方法學(xué)上的研究主要獲得了以下結(jié)果:首先建立了一種高效直接提取土壤DNA進(jìn)行PCR方法.設(shè)計(jì)、比較了5種直接從土壤中提取DNA的方法,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這5種方法都可以從土壤中提取到長度大于15Kb的DNA片段,但在不同方法間DNA的產(chǎn)量存在很大差異;粗提的土壤DNA經(jīng)進(jìn)一步提純后均可用于PCR反應(yīng),利用細(xì)菌16S

2、 rRNA基因和抗菌肽Shiva-1基因的引物都得到了相應(yīng)的目的產(chǎn)物.其中方法5提取DNA產(chǎn)量最高,無明顯降解,且重復(fù)性好,是一種從小量土壤樣品中直接提取DNA的理論方法.其次應(yīng)用PCR-DGGE分析細(xì)菌間親緣關(guān)系,以8個(gè)菌株為研究對(duì)象,通過分析細(xì)菌16S rRNA基因片段和rpoB基因片段的電泳圖譜可以確定細(xì)菌間的親緣關(guān)系,其結(jié)果與通過序列分析的相一致;這表明PCR-DGGE是一種非常有效而且簡單的細(xì)菌間親緣關(guān)系鑒定方法.轉(zhuǎn)抗菌肽基因

3、泡桐的微生態(tài)安全研究主要從轉(zhuǎn)抗菌肽基因泡桐對(duì)土壤中可培養(yǎng)細(xì)菌種菌種群影響及轉(zhuǎn)基因泡桐對(duì)根際細(xì)菌總種群影響等方面進(jìn)行了研究.分離到轉(zhuǎn)基因泡桐及對(duì)照泡桐根際及根圍土壤中優(yōu)勢(shì)細(xì)菌種群,并對(duì)分離的細(xì)菌進(jìn)行了鑒定;結(jié)果表明兩者在細(xì)菌組成上都是以芽孢桿菌和假單胞桿菌為主,其中芽孢桿菌又以巨大芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌為主,從細(xì)菌種群組成上沒有發(fā)現(xiàn)差異.此外進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因泡桐對(duì)蘇云金芽孢桿菌Bacillus thringiensis和苜蓿中華根瘤菌Sino

4、hizobium melilot影響的研究,結(jié)果表明:半年后,兩種供試菌在半年后兩種泡桐植株的根際土壤中的數(shù)量均有大幅的減少,但是轉(zhuǎn)基因植株和對(duì)照植株在減少的量上沒有顯著差異.以此同時(shí),在一個(gè)周期內(nèi)分別提取武昌苗圃和許昌苗圃轉(zhuǎn)基因泡桐與對(duì)照泡桐根際土壤中的細(xì)菌總DNA,分別PCR擴(kuò)增16S rRNA基因與rpoB基因片段,然后進(jìn)行DGGE;通過比較在不同時(shí)期內(nèi)轉(zhuǎn)基因泡桐與對(duì)照泡桐的電泳圖中條帶差異尋找轉(zhuǎn)基因泡桐可能對(duì)細(xì)菌種群產(chǎn)生的影響.