大鼠肝抗菌肽基因的克隆、表達及活性分析.pdf

1、肝臟是哺乳動物體內再生能力極強的器官。肝再生是一個網(wǎng)絡化、受精細調控的復雜過程，涉及到大量的功能基因和蛋白質。本文通過利用抑制性消減雜交技術和基因芯片相結合，尋找肝再生中的差異表達基因，并且克隆和分析與肝再生有關的基因(肝抗菌肽)及其在大鼠肝再生中的動態(tài)變化，以探尋它對肝再生的作用，為研究肝再生分子機理奠定基礎。方法：提取大鼠SISPH肝再生材料的總RNA，用抑制性削減雜交技術篩選出與肝再生有關的基因(EST)；把這些EST制成大鼠肝再

2、生表達譜基因芯片；利用生物信息學和分子生物學技術預測并克隆與肝再生有關的肝抗菌肽基因；利用原核表達技術表達和純化出肝抗菌肽；用RT-PCR進一步對肝抗菌肽基因mRNA在大鼠SISPH的變化動態(tài)進行檢測；利用生物信息學對肝抗菌肽基因和蛋白進行分析，并對其抗菌活性和肝再生中的功能作出預測。結果：通過大鼠SISPH表達譜基因芯片，檢測出216個在肝再生中有差異表達的基因，其中131個為差異性顯著的基因；克隆出與肝再生相關的肝抗菌肽基因；生物信

3、息學分析結果為，大鼠肝抗菌肽前體由255個堿基組成，其成熟肽基因由63個堿基組成，定位于1q21。經(jīng)原核表達后，肝抗菌肽前體的融合蛋白表現(xiàn)為不溶性，而肝抗菌肽成熟肽的融合蛋白則表現(xiàn)為可溶性，肝抗菌肽前體由84個氨基酸組成，1-24個氨基酸為信號肽區(qū)，25-64個氨基酸為前區(qū)，65-84個氨基酸則為成熟肽。肝抗菌肽成熟肽中含有8個Cys，它在不同物種中具有高度的保守性，為發(fā)卡狀的空間結構。結論：與大鼠肝再生有關的基因通過信號傳導等途徑在肝