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文檔簡介
1、目的；觀察結(jié)合于Bcl-xlmRNA上低自由能區(qū)域的反義寡核苷酸對Bcl-xl基因的抑制效應，以及對人乳腺癌細胞系MCF-7細胞體外增殖和凋亡的影響 方法；基于最小自由能算法分析出Bcl-xlmRNA上的低結(jié)合自由能區(qū)域，并針對這一區(qū)域合成反義核酸As587；轉(zhuǎn)染高表達Bcl-xl的人乳腺癌細胞系MCF-7；倒置顯微鏡及透射電子顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學改變；MTT法測定細胞增殖抑制率，RT-PCR檢測Bcl-xlmRNA水平；免疫
2、細胞化學方法檢測Bcl-xl蛋白表達;流式細胞術檢測細胞周期及凋亡發(fā)生率。 結(jié)果；1.MCF-7細胞增殖受抑，且抑制效應與寡核苷酸濃度、作用時間呈量效及時效關系 2.Bcl-xlmRNA及蛋白表達水平下降，細胞出現(xiàn)凋亡 結(jié)論；1.As587能抑制Bcl-xl基因的表達，在體外能抑制乳腺癌細胞增殖 2.對于較短的mRNA，利用最小自由能原理對其設計反義核酸是一種可以信賴的方法，以此方法設計的反義核酸As58
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