新型香豆素類化合物對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:在全球范圍內(nèi),乳腺癌是女性發(fā)病率最高的癌癥并位居女性癌癥死因首位。作為一種激素依賴性的全身性疾病,目前提倡針對(duì)乳腺癌采取手術(shù),放、化療,內(nèi)分泌治療和分子靶向治療的綜合治療手段,其中以他莫昔芬(TAM)為代表的抗雌激素藥物是目前最常用的乳腺癌內(nèi)分泌治療藥物。然而,在進(jìn)行TAM治療的過(guò)程中,往往會(huì)發(fā)生耐藥現(xiàn)象,這也成為制約乳腺癌內(nèi)分泌治療成功的主要障礙。為了提高TAM的療效,一些實(shí)驗(yàn)室對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了改造,合成了與其結(jié)構(gòu)類似的新型香豆素

2、類化合物,在前期的研究中發(fā)現(xiàn),該類化合物對(duì)包括乳腺癌細(xì)胞在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞有很強(qiáng)的抗增殖能力且對(duì)正常細(xì)胞的細(xì)胞毒性較低,但其作用的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本課題通過(guò)采用CellTiter96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay Kit(MTS法)、流式細(xì)胞術(shù)PI染色法、Western blot法及實(shí)時(shí)定量PCR法(RT-PCR法)檢測(cè)新型香豆素類化合物對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖和凋

3、亡的影響,旨在為新型抗腫瘤藥物的研發(fā)提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
  方法:常規(guī)培養(yǎng)MCF-7人乳腺癌細(xì)胞,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
  1、MTS法檢測(cè)不同濃度(0、5、10、15、20μmol/L)的TAM和新型香豆素類化合物作用細(xì)胞48h后對(duì)增殖的影響,計(jì)算并比較兩種化合物對(duì)MCF-7細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50);
  2、流式細(xì)胞術(shù)PI染色法檢測(cè)IC50濃度的TAM和新型香豆素類化合物對(duì)細(xì)胞周期的影

4、響;
  3、Western blot法和RT-PCR法分別檢測(cè)兩種化合物在各自IC50濃度時(shí)作用于MCF-7細(xì)胞48h后對(duì)Cyclin D1、NF-κB(P65)、p-NF-κB(P65)、Bcl-2、Bax蛋白及其mRNA表達(dá)情況的影響。
  所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-X±s)表示,并應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行后續(xù)處理,均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)或方差分析(ANOVA S-N-K)檢驗(yàn),以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義。
  結(jié)果:
  1、MTS法結(jié)果顯示,分別以不同濃度(0、5、10、15、20μmol/L)的TAM和新型香豆素類化合物培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞48h后,細(xì)胞的增殖均受到抑制,且隨藥物濃度增大抑制作用增強(qiáng);依據(jù)MTS結(jié)果得到TAM和新型香豆素類化合物對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的IC50值分別為13.72±1.85μmol/L和7.18±1.39μmol/L。
  2、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示TAM和新型香豆素類化合物均可以使

6、G1期細(xì)胞增加,S期及G2期細(xì)胞減少,且細(xì)胞對(duì)照組、TAM和新型香豆素類化合物三組之間相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均小于0.05)。
  3、Western blot和RT-PCR的結(jié)果分別提示,在蛋白及mRNA水平,兩種化合物均可以使CyclinD1、NF-κB(P65)、p-NF-κB(P65)及Bcl-2的表達(dá)下調(diào)并可以上調(diào)Bax的表達(dá),且新型香豆素類化合物的作用>TAM>細(xì)胞對(duì)照組(P值均小于0.05)。
  結(jié)論:

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