Survivin反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7生長(zhǎng)及對(duì)長(zhǎng)春瑞濱增敏作用.pdf

1、研究背景與目的: Survivin屬于凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族成員，呈組織與周期特異性高表達(dá)于人類大多數(shù)腫瘤組織，并且與腫瘤細(xì)胞的凋亡、細(xì)胞周期、增殖及對(duì)化療藥物的敏感性密切相關(guān)。本研究旨在探討survivin反義寡核苷酸（ASODN）對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的誘導(dǎo)凋亡、特異性周期阻滯、抑制增殖等生物學(xué)行為及對(duì)長(zhǎng)春瑞濱的增敏作用。 研究方法:

2、用脂質(zhì)體介導(dǎo)survivin-ASODN轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7，實(shí)驗(yàn)采用半定量RT-PCR方法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞中survivin基因mRNA的表達(dá)，Western blot方法檢測(cè)survivin基因蛋白的表達(dá)，Annexin V/PI雙染法通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率變化，利于PI染色通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期時(shí)相變化，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況及對(duì)長(zhǎng)春瑞濱的敏感性，電子顯微鏡下觀察反義轉(zhuǎn)染對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的凋亡誘

3、導(dǎo)下形態(tài)學(xué)變化。 研究結(jié)果: （1）survivin-ASODN轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞48h后，survivin mRNA表達(dá)明顯下降，且在一定范圍內(nèi)其抑制效應(yīng)呈濃度依賴趨勢(shì)。A200組、A400組、A600組分別下調(diào)至80.24％、68.52％、49.17％。與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不同濃度反義轉(zhuǎn)染組之間相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （2）survivin-ASODN轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)

4、胞48h后，survivin蛋白表達(dá)明顯下降，且在一定范圍內(nèi)其抑制效應(yīng)呈濃度依賴趨勢(shì)。A200組、A400組、A600組分別下調(diào)至75.14％、61.09％、29.73％。與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不同時(shí)間和不同濃度反義轉(zhuǎn)染組之間相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （3）survivin-ASODN轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞后抑制細(xì)胞增殖，并呈時(shí)間、濃度依賴性。A200、A400、A600組的48h增殖抑制率分

5、別為35.25％、46.41％和60.36％，A600組24、48和的72h增殖抑制率分別為29.05％、60.36％和69.08％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （4）survivin-ASODN轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞后發(fā)生特異性周期阻滯，A600組細(xì)胞48h主要阻滯于G2/M期，該期細(xì)胞占（41.63±2.11）％，正常對(duì)照組、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組、正義轉(zhuǎn)染組G2/M期的細(xì)胞比例分別為（20.86±0.72）％、（23.15±1.0

6、7）和（24.17±0.96）％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。 （5）A600組細(xì)胞凋亡率較高，凋亡率達(dá)（18.39±1.06）％，正常對(duì)照組、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組、正義轉(zhuǎn)染組凋亡率分別為（7.05±0.56）％、（6.09±0.61）％和（6.81±0.74）％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （6）survivin-ASODN增加MCF-7細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春瑞濱的敏感性，ASODN組細(xì)胞存活率隨著長(zhǎng)春瑞濱濃度的增高而下降，且下

7、降程度與ASODN濃度呈正相關(guān)關(guān)系，A200、A400、A600組的IC50值分別為（5.1±0.52）μg/mL，（4.6±0.57）μg/mL，（3.7±0.42）μg/mL；S600組、Lip組和正常組分別為（6.6±0.74）μg/mL，（6.8±0.81）μg/mL和（7.1±0.68）μg/mL，相比ASODN組的IC50值明顯下降，方差分析差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （7）透射電子顯微鏡下觀察A600組細(xì)胞