暹羅鱷膽汁提取物抗膽管癌細(xì)胞的作用機(jī)理研究.pdf

1、膽管癌是起源于肝內(nèi)或肝外膽管上皮的惡性膽道腫瘤。由于膽管癌的早期癥狀不明顯、發(fā)現(xiàn)困難，一旦發(fā)現(xiàn)多數(shù)已進(jìn)入晚期，很難通過(guò)手術(shù)方法切除治療，因此，尋找其他非手術(shù)方法治療膽管癌就變得十分必要。目前臨床應(yīng)用的藥物對(duì)膽管癌敏感性欠佳，而且存在明顯毒副作用。因此，尋找更敏感、有效的藥物，提高膽管癌藥物治療的療效就變得十分必要。動(dòng)物膽汁藥具有活性強(qiáng)、療效顯著、副作用小等特點(diǎn)，在我國(guó)傳統(tǒng)中藥中有大量應(yīng)用。近年來(lái)，動(dòng)物膽汁的抗腫瘤作用備受關(guān)注，但是有關(guān)鱷

2、魚(yú)膽汁抗腫瘤活性的相關(guān)研究很少。
　　 本論文以體外培養(yǎng)的人膽管癌QBC939細(xì)胞為藥物篩選模型，從暹羅鱷膽汁中篩選獲得具有抑制膽管癌細(xì)胞生長(zhǎng)的活性物質(zhì)，命名為鱷膽素，并進(jìn)一步探討其抑制膽管癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用機(jī)理。通過(guò)MTT法、細(xì)胞形態(tài)觀察法、流式細(xì)胞術(shù)等方法研究表明：鱷膽素呈時(shí)間和劑量依賴性抑制膽管癌QBC939細(xì)胞的增殖、使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化、使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；采用MTT法、劃痕法、Transwel

3、l細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)研究了鱷膽素對(duì)膽管癌細(xì)胞遷移、侵襲和黏附能力的影響。結(jié)果表明鱷膽素對(duì)膽管癌細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲能力均有明顯的抑制作用。通過(guò)Western blot等方法研究表明：鱷膽素下調(diào)了Bcl-2蛋白表達(dá)，促使Cytc從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中，上調(diào)了Fas蛋白的表達(dá)。推測(cè)鱷膽素能激活線粒體信號(hào)通路誘導(dǎo)QBC939細(xì)胞凋亡，和Fas/FasL信號(hào)通路也密切相關(guān)。
　　 進(jìn)一步探討鱷膽素抗膽管癌作用的分子機(jī)制和藥物作用靶點(diǎn)，首次應(yīng)

4、用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究了鱷膽素對(duì)人膽管癌QBC939細(xì)胞全蛋白表達(dá)譜的影響。成功鑒定出激酶、RNA加工蛋白、核蛋白、膜聯(lián)蛋白和代謝相關(guān)酶等差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)。結(jié)合這些蛋白的功能，分析了鱷膽素抗膽管癌作用的可能的分子機(jī)制。為鱷膽素抗膽管癌作用新靶點(diǎn)的闡明提供了新的思路和線索，也為膽管癌的藥物治療提供了新的線索。
　　 采用灌胃的方式，對(duì)鱷膽素進(jìn)行了小鼠急性毒理實(shí)驗(yàn)分析。結(jié)果顯示部分小鼠出現(xiàn)抽搐、行動(dòng)呆滯等癥狀。根據(jù)改良寇氏法算出鱷膽素