二甲雙胍對(duì)大鼠焦慮和恐懼行為的作用及機(jī)制.pdf

1、第一部分、二甲雙胍拮抗大鼠焦慮樣行為的機(jī)制
　　目的：前期實(shí)驗(yàn)表明，二甲雙胍通過激活A(yù)MPK-FOXO3a-GABARAP信號(hào)通路，促進(jìn)GABAA受體膜轉(zhuǎn)運(yùn)，并具有快速抗焦慮作用。那么，二甲雙胍的抗焦慮作用是否與AMPK-FOXO3a-GABARAP信號(hào)通路激活有關(guān)呢？基于此，本部分實(shí)驗(yàn)主要是通過行為學(xué)探討二甲雙胍快速抗焦慮作用的機(jī)制。
　　方法：采用曠場實(shí)驗(yàn)及高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)shRNA-AMPK和shRNA-FOXO3

2、a對(duì)二甲雙胍抗焦慮作用以及自發(fā)活動(dòng)等的影響；采用western blotting檢測(cè)海馬CA1區(qū)shRNA-AMPK和shRNA-FOXO3a沉默效率；采用曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮檢測(cè)特異性干擾肽TAT-GABARAP本身對(duì)于基礎(chǔ)焦慮水平的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）海馬CA1區(qū)shRNA-AMPK阻斷二甲雙胍在曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中的抗焦慮作用。海馬CA1區(qū)給予shRNA-AMPK后，二甲雙胍不能增加大鼠進(jìn)入中央?yún)^(qū)的

3、時(shí)間，亦不能增加大鼠進(jìn)入開放臂的時(shí)間。
　?。?）海馬CA1區(qū)shRNA-FOXO3a阻斷二甲雙胍在曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中的抗焦慮作用。海馬CA1區(qū)給予shRNA-FOXO3a抑制二甲雙胍促進(jìn)大鼠進(jìn)入中央?yún)^(qū)的時(shí)間，以及進(jìn)入開放臂的時(shí)間。
　　（3）TAT-GABARAP干擾肽不影響動(dòng)物的自發(fā)活動(dòng)能力和基礎(chǔ)焦慮水平，表現(xiàn)為TAT-GABARAP干擾肽不影響大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中進(jìn)入中央?yún)^(qū)的時(shí)間，也不影響大鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中進(jìn)

4、入開放臂的時(shí)間。
　?。?）二甲雙胍對(duì)焦慮樣行為的改善作用均不影響自發(fā)活動(dòng)。
　　結(jié)論：治療II型糖尿病藥物二甲雙胍通過激活A(yù)MPK-FOXO3a-GABARAP信號(hào)通路而產(chǎn)生快速抗焦慮樣行為的作用，為二甲雙胍用于臨床治療焦慮癥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　第二部分、二甲雙胍對(duì)大鼠線索型恐懼記憶消散的作用及機(jī)制
　　目的：研究報(bào)道證實(shí)基底外側(cè)杏仁核BLA區(qū)促進(jìn)GABAA受體的膜轉(zhuǎn)運(yùn)有利于調(diào)控恐懼記憶消散，而本實(shí)驗(yàn)前期研究

5、發(fā)現(xiàn)二甲雙胍促進(jìn)海馬神經(jīng)元GABAA受體膜轉(zhuǎn)運(yùn)，那么二甲雙胍對(duì)于線索依賴性條件恐懼記憶消散有何影響呢？目前尚未有報(bào)道。因此，本部分主要研究二甲雙胍對(duì)線索依賴性條件恐懼記憶消散的作用及其機(jī)制。
　　方法：采用條件恐懼實(shí)驗(yàn)檢測(cè)濃度梯度二甲雙胍對(duì)恐懼記憶的作用；采用曠場實(shí)驗(yàn)檢測(cè)二甲雙胍對(duì)自發(fā)活動(dòng)能力和焦慮樣行為的影響；采用足底電擊方式檢測(cè)二甲雙胍對(duì)痛閾的影響，采用強(qiáng)生血糖測(cè)試儀及試紙檢測(cè)二甲雙胍對(duì)正常血糖水平的影響；采用腦區(qū)局部給藥結(jié)合

6、條件恐懼實(shí)驗(yàn)考查TAT-GABARAP干擾肽對(duì)二甲雙胍易化消散作用的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）腹腔注射100mg/kg劑量二甲雙胍，顯著降低經(jīng)過短時(shí)間消散訓(xùn)練的SD大鼠的僵直率，易化恐懼記憶的消散，而50mg/kg和200mg/kg則對(duì)恐懼消散無影響；
　?。?）二甲雙胍易化消散的作用不影響影響動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)能力，以及機(jī)體對(duì)傷害性反應(yīng)的閾值，亦不改變正常的血糖水平，
　?。?）BLA腦區(qū)給予TAT-GABARA