白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病大鼠胰島細(xì)胞保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:2型糖尿病患者占全部糖尿病人群中的90％以上,以高血糖、周?chē)M織對(duì)胰島素抵抗及最終胰島β細(xì)胞衰竭為特征。糖尿病患者發(fā)生心血管疾病、腎臟損傷、神經(jīng)病變、失明及肢端缺血的風(fēng)險(xiǎn)大大增加。白藜蘆醇為天然植物保護(hù)素,主要存在于葡萄果皮和紅酒中。己發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇具有抗氧化、抗炎癥、抗腫瘤和抗血小板等多重功效。近年來(lái),白藜蘆醇被發(fā)現(xiàn)具有抗糖尿病和胰島素樣作用。然而,其對(duì)糖尿病胰島細(xì)胞的保護(hù)作用鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)高脂飼養(yǎng)聯(lián)合腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素致

2、2型糖尿病大鼠模型,觀察了白藜蘆醇對(duì)大鼠血糖、血胰島素、血脂水平以及胰島細(xì)胞NF-κB、iNOS和caspase表達(dá)的影響,探討了白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病胰島細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　 方法:
　　 健康清潔級(jí)wistar大鼠30只,適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后,隨機(jī)分為A組(n=10)、B組(n=20)。A組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),B組給予高脂飼料喂養(yǎng)。8周后,在胰島素抵抗的基礎(chǔ)上,B組給予腹腔注射1％鏈脲佐菌素30 mg/kg造模。三

3、天后空腹血糖≥16.7 mmol/l且持續(xù)2周為造模成功。成模后,隨機(jī)將B組分為糖尿病模型組(DM組,n=9)、白藜蘆醇干預(yù)組(RES組,n=10),A組為正常對(duì)照組(NC組,n=10)。RES組大鼠于每日固定時(shí)間給予白藜蘆醇混懸液100mg/kg灌胃1次。NC、DM組給予相同劑量生理鹽水。各組大鼠自由飲食飲水。7周后,各組大鼠禁食10小時(shí),麻醉后,大鼠留取血標(biāo)本和胰腺組織標(biāo)本。
　　 1：血糖、胰島素的測(cè)定
　　 血糖

4、用葡萄糖氧化酶法測(cè)定;胰島素用放射免疫法測(cè)定。采用穩(wěn)態(tài)模型(Homeoestasis ModelAssessment,HOMA)及胰島素敏感指數(shù)(InsulinSensitivity Index,ISI)評(píng)價(jià)胰島素抵抗的程度。
　　 2：血脂的測(cè)定
　　 甘油三脂(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterole,TC)采用比色法測(cè)定。
　　 3：胰腺形態(tài)學(xué)檢查
　　 4％

5、多聚甲醛固定,梯度酒精脫水,標(biāo)準(zhǔn)組織技術(shù)石蠟包埋。HE染色初步觀察胰島形態(tài),免疫組化檢測(cè)NF-κB、iNOS、Insulin、Caspase-3的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1：對(duì)血糖、胰島素的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),糖尿病模型組空腹血糖(24.54±1.82 mmol/L)明顯高于正常組(5.35±0.90 mmol/L)(P＜0.01),白藜蘆醇干預(yù)組(21.01±1.70 mmol/L)則明顯低于模型組(P＜0.01);模

6、型組空腹胰島素水平(43.08±4.26 mIU/L)明顯高于正常組(33.43±3.75 mIU/L)(P＜0.01),干預(yù)組(37.84±2.46 mIU/L)則低于模型組(P＜0.05)。糖尿病模型組胰島素抵抗指數(shù)(3.84±0.17)明顯高于正常對(duì)照組(2.06±0.26)(P＜0.01),而胰島素敏感指數(shù)(-6.96±0.17)明顯低于正常組(-5.17±0.26)(P＜0.01),經(jīng)白藜蘆醇治療后兩者均得到改善(P＜0.05

7、)。
　　 2：對(duì)血脂的影響模型組大鼠的TG、TC均明顯升高,與正常組相比有顯著性差異(P＜0.01),白藜蘆醇干預(yù)組的TG、TC比模型組明顯降低(P＜0.01),但仍高于正常組(P＜0.01)。
　　 3：胰腺病理形態(tài)的改變HE染色光鏡下觀察,正常組大鼠胰島形態(tài)規(guī)則,圓形或者橢圓形,細(xì)胞數(shù)目較多,分布均勻,排列規(guī)整,結(jié)構(gòu)清晰。模型組胰島形態(tài)不規(guī)則,細(xì)胞核大小不等胞漿腫脹或胞少,可見(jiàn)空泡變性。白藜蘆醇干預(yù)組病理改變介于兩

8、組之間。
　　 4：胰腺組織Insulin免疫組化胰島β細(xì)胞胞漿呈棕黃色為陽(yáng)性。模型組陽(yáng)性β細(xì)胞占(12.97±3.81％),明顯低于正常組(60.58±6.53％)(P＜0.01),白藜蘆醇干預(yù)組陽(yáng)性率(36.98±6.21％)較模型組上升(P＜0.01),提示白藜蘆醇干預(yù)后β細(xì)胞數(shù)量增加,仍然低于正常組(P＜0.01)。
　　 5：胰腺組織NF-κB、iNOS免疫組化NF-κB陽(yáng)性物在細(xì)胞的胞核和(或)胞漿表達(dá),iN

9、OS陽(yáng)性物在細(xì)胞的胞膜和胞漿表達(dá)。模型組NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為(55.63±3.61％),較正常組(12.55±1.65％)顯著增高(P＜0.01),白藜蘆醇干預(yù)后(35.98±3.46％)較模型組顯著降低(P＜0.01)。在糖尿病模型組iNOS陽(yáng)性光密度值為(0.213±0.026)顯著高于正常組(0.033±0.015)(P＜0.01),白藜蘆醇干預(yù)后(0.186±0.025)顯著低于模型組(P＜0.05),仍高于正常組(P＜0.0

10、1)。
　　 6：胰腺組織Caspase-3免疫組化Caspase-3在胞漿表達(dá)。模型組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(78.64±5.18％)較正常組(10.48±3.14％)顯著增高(P＜0.01),干預(yù)組(53.98±4.88％)較模型組顯著降低(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1：2型糖尿病大鼠血糖、血脂增高,胰島素抵抗程度增加,胰島素敏感性降低,表達(dá)indulin的陽(yáng)性β細(xì)胞數(shù)量減少;胰腺組織NF-κB、iNOS、C