苦酸制甜法保護2型糖尿病胰島β細胞功能的作用及機制研究.pdf

1、糖尿病是慢性復雜性疾病，嚴重危害人類健康，積極開展糖尿病的防治工作已成為主要的社會公共衛(wèi)生問題。導師從事糖尿病醫(yī)療與科學研究近二十年，通過豐富的臨證經(jīng)驗結合科研成果提煉出肥、糖、絡整體治療2型糖尿病的學術觀點，苦酸制甜是其重要的治療法則之一。本論文在導師指導下，首先對糖尿病相關的歷代文獻進行了梳理，結合導師臨床經(jīng)驗與辨治思維完成了苦酸制甜法的理論研究；其次運用現(xiàn)代科學研究方法與技術從整體--細胞--分子三個層次開展了苦酸制甜法保護2型糖

2、尿病胰島細胞功能及機制的研究，以此探討了糖尿病中醫(yī)藥防治理論和導師臨床經(jīng)驗的科學內(nèi)涵。 一、理論研究 1 歷代醫(yī)家著述對糖尿病的中醫(yī)藥治療學具有指導意義 通過對中醫(yī)學有關消渴(病)的認識歷代文獻梳理，可以看出，中醫(yī)學對消渴(病)的認識源于春秋戰(zhàn)國時期，發(fā)展于唐宋，成熟于明清。其中三消論的提出具有重要的意義，標志著消渴(病)辨治體系的形成。尤其是“陰虛為本，燥熱為標”的消渴病機認識對后世辨治消渴及糖尿病具有重要的指

3、導意義。“陰虛為本，燥熱為標”是古人認識三消論的一種觀點，它的提出在當時是有先進意義的，其已認識到消渴(病)的復雜性，并正確認識到發(fā)展至中后期消渴的病機本質(zhì)。推動了中醫(yī)辨治消渴病的發(fā)展。但以此辨治糖尿病存在著一定的局限性，其因有三：l糖尿病不完全等同于消渴?。?“陰虛為本，燥熱為標”不能囊括消渴(病)早期的病機變化；3古今生活環(huán)境、飲食習慣、疾病譜等發(fā)生了巨大改變，需要探索新的治療方法完善糖尿病的中醫(yī)治療學。 2 導師應用苦酸制

4、甜法治療糖尿病的學術經(jīng) 驗苦酸制甜法是導師肥、糖、絡整體辨治2型糖尿病治療法則的重要治法之一。導師通過對2型糖尿病與消渴異同的思考發(fā)現(xiàn)，糖尿病以血糖升高為診斷依據(jù)，為生物化學診斷，消渴(病)以癥狀為診斷依據(jù)，具有典型“三多一少”癥狀的糖尿病應按消渴(病)辨治，然而隨著疾病譜、癥狀譜的變化，對2型糖尿病尤其是肥胖者的因機證治應重新思考。導師認為2型糖尿病，尤其是肥胖2型糖尿病其病機以郁熱為常見，其病機隨病程遷延而演變，常由實熱轉(zhuǎn)為

5、虛熱，而苦能瀉熱，酸能輔佐苦瀉熱，故針對2型糖尿病病機擬苦酸相伍以制甜?？嗨嶂铺鸱▎⒃从趯煂εR證經(jīng)驗的提煉，同時苦酸制甜法在導師通過對糖尿病相關中醫(yī)古籍文獻的思考與反復的臨床驗證中逐漸得以完善。導師受自然中苦味是甜味的對立，酸味是甜味的綜合的現(xiàn)象啟發(fā)，又《素問·至真要大論》日：“辛甘發(fā)散為陽，酸苦涌泄為陰”，酸味、苦味屬陰，甘味屬陽，而糖尿病的典型癥狀尿甜屬甘味，以苦味、酸味之陰調(diào)甘味之陽，以達“陰平陽秘，精神乃治”?？嗨嶂铺鸱ㄊ菍?/p>

6、將臨證經(jīng)驗和中醫(yī)藥傳統(tǒng)理論--四氣五味藥性理論及陰陽理論相結合而提出。法立則方出，具體選方可遵循以下四點：1辨病程定主方；2辨證素定主方；3辨肥胖定主方，兼顧血脂與血壓；4苦味酸味不拘于方證--中藥藥理學的啟示。選方多為連梅湯、烏梅丸等經(jīng)方或名方。但劑量配伍及藥味配伍有異于原方?？嗨嶂铺鸱ㄟm合于肥胖2型糖尿病及失眠、煩躁、盜汗等存在血糖難控因素者。糖尿病是復雜性疾病，病程遷延，其病因病機非單一所能囊括，應適當調(diào)整藥味的配伍，另苦酸制甜法

7、如長時間應用為避免苦寒藥傷胃氣，可選擇辛、甘味的佐制。 通過對歷代醫(yī)家有關消渴(病)著述的學習，筆者深感中醫(yī)學認識疾病、辨治疾病具有先進性，諸多醫(yī)家辨治消渴(病)的經(jīng)驗對豐富、完善糖尿病的中醫(yī)辨治方法具有重要的參考價值。2型糖尿病不完全等同于古代消渴(病)，因此需要針對其病因病機積極的探索新的治療方法，導師著眼于2型糖尿病多郁熱的病機，提出苦酸制甜法，是對2型糖尿病中醫(yī)辨治理論的探索，力爭完善和補充糖尿病中醫(yī)治療學。 二

8、、實驗研究 導師課題組先后開展了肥、糖、絡整體治療2型糖尿病的臨床與實驗研究，其中課題組發(fā)現(xiàn)苦酸制甜法可以降低導師門診肥胖2型糖尿病初診患者血糖水平。為進一步驗證苦酸制甜法的療效，探討其機理本課題開展了系列實驗研究。以模擬2型糖尿病大鼠和高糖培養(yǎng)的BTc3細胞系為載體，采用OGTT、IVGTT、免疫組化、實時熒光定量PCR、激光共聚焦、TUNEL 等多種技術方法，對苦酸制甜法保護2型糖尿病胰島細胞功能和機制進行了系列研究，初步結

9、果如下： 1 建立模擬2型糖尿病大鼠模型，其尚存一部分胰島細胞功能，為動態(tài)觀察2型糖尿病藥物療效和機制研究提供了可選擇的動物模型。 2 苦酸制甜法可以調(diào)整模擬2型糖尿病大鼠的糖代謝，OGTT、IVGTT、糖化血清蛋白實驗檢測均支持上述結果，并且IVGTT 實驗表明苦酸制甜法可以保護模擬2型糖尿病大鼠胰島細胞功能。 3 糖毒性是胰島細胞功能損傷的重要原因之一，免疫組化的方法表明苦酸制甜法可以增加B細胞數(shù)量、使胰島細

10、胞GLUT2表達增多，提示苦酸制甜法保護模擬2型糖尿病大鼠胰島細胞功能可能與其改善糖毒性有關。 4 苦酸制甜法對高糖培養(yǎng)的BTc3細胞胰島素分泌情況的影響表明該法可以減輕糖毒性，有助于恢復高糖抑制的BTc3細胞胰島素分泌。 5 苦酸制甜法保護胰島細胞功能可能的分子機制在于提高PDX-1、GCKmRNA的表達，而PDX—1、GCK基因表達的減少在糖毒性胰島細胞功能缺陷中起著至關重要的作用。PDX-1是胰島素基因最重要的轉(zhuǎn)錄

11、激活因子，同時也是葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖轉(zhuǎn)運體2(GLUT2)等與胰島素釋放有關的一組基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。長期高血糖抑制PDX-1的表達及其與TATA盒和hUPE3的結合，也就抑制了GLUT2和GK基因的表達，使B細胞內(nèi)GLUT2和GK的mRNA水平下降，GLUT2和GK的合成減少，胰島素釋放減少，研究結果初步表明苦酸制甜方可以提高高糖抑制的PDX-1、GCK mRNA的表達，因此推測苦酸制甜法通過減輕糖毒性，保護胰島細胞功能。

12、 上述實驗初步探討了苦酸制甜法的療效及可能的機制，為課題組進一步研究苦酸制甜法奠定了基礎，提供了方向。同時實驗應用的方法和技術為相關研究工作提供了一定的參考。 三、本研究特色和創(chuàng)新之處 1 文獻研究中，苦酸制甜法是導師集多年臨證經(jīng)驗，對2型糖尿病的病因病機進行梳理，基于四氣五味藥性理論和中醫(yī)陰陽理論提出的糖尿病中醫(yī)治法，本研究首次系統(tǒng)對導師苦酸制甜法的臨證應用進行分析，總結導師應用苦酸制甜法治療糖尿病的辨治規(guī)律，為糖

13、尿病臨床治療提供了新思路。 2 實驗研究中，以高脂加STZ誘導的模擬實驗性2型糖尿病大鼠、高糖培養(yǎng)的βTc3細胞為模型，從調(diào)控糖代謝的整體效應、胰島細胞功能、β細胞數(shù)、βTc3細胞胰島素分泌、葡萄糖激酶(GCK)、葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(GLUT2)、胰腺十二指腸同源異型盒(PDx—1)表達等角度，從整體--細胞--分子不同層次深入探討了苦酸制甜法保護胰島細胞功能，治療2型糖尿病的科學性，國內(nèi)外文獻未見同類報道。 3 理論創(chuàng)新