硼替佐米對淋巴瘤細胞中SHP-1基因表達影響的研究.pdf

1、目的:淋巴瘤起源于淋巴結和淋巴組織,其發(fā)生大多與免疫應答過程中淋巴細胞增殖分化產生的某種免疫細胞惡變有關,是免疫系統(tǒng)的惡性腫瘤。通常淋巴瘤患者對傳統(tǒng)的化療方案(如COP,CHOP等)表現(xiàn)出較好的反應,但多數(shù)往往在達到緩解后數(shù)月至數(shù)年的時間內出現(xiàn)復發(fā)。尋求治療新藥及新方案成了當前的一個緊迫問題。體外和動物實驗顯示蛋白酶體抑制劑硼替佐米對包括多發(fā)性骨髓瘤、結腸癌、慢性淋巴細胞白血病和胰腺癌在內的許多惡性腫瘤有抗癌活性,并具有明顯的抗淋巴瘤作

2、用,其作用機制涉及特異性地抑制泛素一蛋白酶體通路(UPP),從而發(fā)揮阻止腫瘤細胞生長、播散及血管生成的作用,其毒副作用小,并與常規(guī)化療藥物無交叉耐藥性。國外基礎研究顯示硼替佐米體外單藥及聯(lián)合其他藥物等均可以抑制多種惡性淋巴瘤細胞株的增殖。
　　 SHP-1(又稱為HCP,SHPTP1,and PTPlc)是一68kD,含有SH2結構域的非跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶,它主要表達于造血細胞且作為關鍵的調控因子調節(jié)細胞內的磷酸化水平,SHP

3、-1調節(jié)不同的跨膜受體胞內信號,SHP.1首先表達在造血干細胞,它特異的下調細胞內跨膜受體信號:即伴體內酪氨酸激酶激活的生長因子受體(c-kit,CSF-1,TrkA和EGF等)、細胞因子受體(Epo-R,IFNα/β-R,IL-3R和EGF等)和參與免疫應答的受體例如TCR絡合物和CD5。Unkeless等發(fā)現(xiàn)在淋巴細胞,SHP-1通過它的SH2結構域與抑制免疫受體CD22,CD72,FcγRⅡB,p70-NKB1和KIR酪氨酸抑制基

4、序(ITIM)粘合,使下游蛋白脫磷酸化,終止生長信號或激活調亡信號,因此,發(fā)生在淋巴細胞內的SHP-1機能障礙會導致淋巴瘤、白血病或其他腫瘤的發(fā)生。本實驗擬探討硼替佐米對淋巴瘤細胞株Raji細胞生長抑制及誘導凋亡的作用,并探討SHP-1基因在此過程中所起的作用,為臨床尋找新的治療靶點提供理論依據(jù)。
　　 方法:通過細胞培養(yǎng)的方法對淋巴瘤細胞株Raji進行傳代培養(yǎng),用不同濃度的硼替佐米對其進行處理,于不同時段收取細胞,應用MTT法

5、檢測Raji細胞增殖抑制率,應用流式細胞術檢測細胞凋亡率,用實時定量PCR的方法檢測實驗組與對照組SHP-1基因mRNA的表達水平。
　　 結果:
　　 1.隨著硼替佐米濃度、干預時間增加,Raji細胞增殖均有明顯的抑制作用,存在明顯的劑量依賴性和時間依賴性。
　　 2.隨著硼替佐米濃度增加,干預時間增加,Raji細胞株凋亡率增加,存在明顯的劑量依賴性和時間依賴性。
　　 3.硼替佐米對Raji細胞中SH

6、P-1mRNA表達的影響
　　 (1)未加藥物組SHP-1mRNA相對表達量明顯低于硼替佐米干預組SHP-1mRNA相對表達量,P<0.05,有統(tǒng)計學意義。
　　 (2)不同濃度藥物干預相同時間,隨著硼替佐米濃度增加,SHP-1mRNA表達水平逐漸升高,P<0.05,有統(tǒng)計學意義。
　　 (3)同一藥物濃度干預不同時間,隨著時間延長,SHP-1表達水平升高,P<0.05,有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:硼替佐