神經(jīng)干細胞、神經(jīng)生長因子聯(lián)合移植治療大鼠阿爾茨海默病的實驗研究.pdf

1、目的：研究神經(jīng)干細胞(neuralstemcells,NSCs)移植及NSCs與神經(jīng)生長因子(NGF)聯(lián)合移植對阿爾茨海默病(AD)大鼠學習記憶的恢復及腦內(nèi)神經(jīng)干細胞的存活、遷移和分化的影響。 方法：①取新生大鼠海馬中神經(jīng)干細胞進行培養(yǎng)，采用免疫熒光細胞化學技術檢測培養(yǎng)細胞巢蛋白(Nestin)的表達。胎牛血清誘導神經(jīng)干細胞分化，行NSE(神經(jīng)元特異烯醇化酶)、GFAP(膠質(zhì)纖維酸性蛋白)免疫細胞化學染色，鑒定神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細

2、胞。 ②單側切斷大鼠穹隆海馬傘(FF)制備AD模型。 ③利用腦立體定位技術分別將神經(jīng)干細胞及神經(jīng)干細胞與NGF聯(lián)合移植于AD大鼠側腦室內(nèi)，移植后兩周和三周作Y-迷宮實驗，檢測大鼠的學習能力和記憶能力。移植后四周取腦應用免疫組化及免疫熒光技術檢測移植后神經(jīng)干細胞的存活、遷移和分化。 結果：從新生大鼠海馬分離的細胞中成功培養(yǎng)出神經(jīng)干細胞，且細胞絕大多數(shù)表達神經(jīng)干細胞的標志物神經(jīng)巢蛋白(Nestin)。胎牛血清的誘導下

3、，我們所分離培養(yǎng)的神經(jīng)球具有多分化潛能，少部分細胞分化為NSE陽性的神經(jīng)元細胞，大部分細胞分化為GFAP陽性的星形膠質(zhì)細胞。 將5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標記的神經(jīng)干細胞、神經(jīng)干細胞與NGF聯(lián)合移植于AD大鼠的側腦室內(nèi)，Y-迷宮測試大鼠的學習、記憶能力：AD組明顯下降(P＜0.01)；神經(jīng)干細胞組(NSCs組)與AD組比較有改善(P＜0.05)神經(jīng)干細胞與NGF聯(lián)合移植組(NGF組)大鼠的學習、記憶能力進一步改善，與NSC

4、s組比較有差異(P＜0.05)，而與正常組比較差異無顯著性(P＞0.05)。免疫組織化學技術檢測顯示：NSCs組及NGF組大鼠側腦室附近區(qū)域可見BrdU陽性細胞，并向周圍遷移NSE免疫組化染色結果顯示，NGF組大鼠腦內(nèi)皮層及海馬區(qū)NSE陽性細胞數(shù)較NSCs組回升顯著(P＜0.01)；用免疫熒光雙標方法檢測，可發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)皮層及海馬區(qū)部分BrdU陽性細胞分化為NSE陽性細胞，NSCs組及NGF組雙陽性細胞總數(shù)占細胞總數(shù)的百分比分別為(18.4