神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)缺血缺氧性腦病新生幼鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的：探討神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)對(duì)缺血缺氧性腦病(HIE)新生幼鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)增殖和分化的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：將10只孕20日鼠隨機(jī)分為手術(shù)組(n=8)和假手術(shù)組(n=2),手術(shù)組結(jié)扎孕鼠雙側(cè)子宮動(dòng)脈15min,建立宮內(nèi)缺血缺氧性腦病模型,假手術(shù)組同樣打開腹腔15min但不結(jié)扎雙側(cè)子宮動(dòng)脈。幼鼠出生后7日分為神經(jīng)生長(zhǎng)因子組(NGF,n=20)、生理鹽水組(NS,n=15)和對(duì)照組(n=14),NGF

2、組注射NGF(20μg/kg/day)+BrdU(50mg/kg),NS組和對(duì)照組則同步注射等量NS+BrdU,連續(xù)7d。不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)幼鼠進(jìn)行生長(zhǎng)發(fā)育及懸吊實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)的測(cè)評(píng)。各組于給藥后1、2、4周,分別用HE染色觀察各組海馬及大腦皮層神經(jīng)元形態(tài)變化,TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)元的凋亡,免疫組化檢測(cè)分別檢測(cè)各組表達(dá)BrdU、Nestin、NSE及GFAP陽性的新生神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目;免疫熒光-激光共聚焦法觀察BrdU/Nestin、BrdU/NS

3、E及BrdU/GFAP的共定位表達(dá)。
　　結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示手術(shù)組幼鼠腦組織有明顯損傷,經(jīng)NGF治療后有所恢復(fù);TUNEL結(jié)果顯示治療后2周NGF組凋亡神經(jīng)元數(shù)目低于NS組而高于假手術(shù)組(P<0.05);免疫組化顯示NGF治療可增加海馬和大腦皮層Nestin、NSE、GFAP的表達(dá);免疫熒光-BrdU雙染結(jié)果顯示Nestin、NSE、GFAP分別在大腦皮層與海馬等部位與BrdU共定位,皆以NGF組表達(dá)量最高,假手術(shù)組最少。