神經生長因子對缺血缺氧性腦病新生幼鼠內源性神經干細胞增殖和分化的影響及作用機制.pdf

1、目的：探討神經生長因子(NGF)對缺血缺氧性腦病(HIE)新生幼鼠內源性神經干細胞(NSCs)增殖和分化的影響及其可能的作用機制。
　　方法：將10只孕20日鼠隨機分為手術組(n=8)和假手術組(n=2),手術組結扎孕鼠雙側子宮動脈15min,建立宮內缺血缺氧性腦病模型,假手術組同樣打開腹腔15min但不結扎雙側子宮動脈。幼鼠出生后7日分為神經生長因子組(NGF,n=20)、生理鹽水組(NS,n=15)和對照組(n=14),NGF

2、組注射NGF(20μg/kg/day)+BrdU(50mg/kg),NS組和對照組則同步注射等量NS+BrdU,連續(xù)7d。不同時間點對幼鼠進行生長發(fā)育及懸吊實驗等行為學的測評。各組于給藥后1、2、4周,分別用HE染色觀察各組海馬及大腦皮層神經元形態(tài)變化,TUNEL法檢測神經元的凋亡,免疫組化檢測分別檢測各組表達BrdU、Nestin、NSE及GFAP陽性的新生神經細胞數(shù)目;免疫熒光-激光共聚焦法觀察BrdU/Nestin、BrdU/NS

3、E及BrdU/GFAP的共定位表達。
　　結果：HE染色結果顯示手術組幼鼠腦組織有明顯損傷,經NGF治療后有所恢復;TUNEL結果顯示治療后2周NGF組凋亡神經元數(shù)目低于NS組而高于假手術組(P<0.05);免疫組化顯示NGF治療可增加海馬和大腦皮層Nestin、NSE、GFAP的表達;免疫熒光-BrdU雙染結果顯示Nestin、NSE、GFAP分別在大腦皮層與海馬等部位與BrdU共定位,皆以NGF組表達量最高,假手術組最少。