miR-338-5p靶向作用于TRAF3參與腎移植術(shù)后抗體介導(dǎo)的免疫排斥.pdf

1、目的：本課題旨在研究miR-338-5p在腎移植患者的表達(dá)特點(diǎn),及其對(duì)BAFF信號(hào)的調(diào)控作用,進(jìn)而探討其在抗體介導(dǎo)的腎移植排斥中的作用及意義。
　　方法：⑴采用共轉(zhuǎn)染方法,利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行miR-338-5p的靶基因驗(yàn)證。⑵收集腎移植患者的血清(健康志愿者為對(duì)照),應(yīng)用real-time PCR法檢測(cè)患者血清中miR-338-5p的表達(dá)差異;ELISA法檢測(cè)血清sBAFF的表達(dá)量;液相芯片技術(shù)檢測(cè)血清中抗HLA-

2、Ⅰ類抗體、抗HLA-Ⅱ類抗體、抗MICA抗體滴度。從而分析miR-338-5p、sBAFF、抗體間的相關(guān)性。⑶在體外試驗(yàn)中,采用以抗IgM抗體和/或重組人BAFF蛋白刺激的CD20+扁桃體B細(xì)胞培養(yǎng)體系,觀察miR-338-5p激動(dòng)劑/拮抗劑、及TRAF3 siRNA干擾作用下,B細(xì)胞分泌IgG、IL-10的水平,來(lái)分析miR-338-5p對(duì)B細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。兩個(gè)獨(dú)立樣本均數(shù)間的比較采用雙側(cè)

3、t檢驗(yàn);配對(duì)樣本均數(shù)間的比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Spearman法及Pearson法;P<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：①雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)驗(yàn)證結(jié)果表明TRAF3和NF-κB1均是miR-338-5p的靶分子,TRAF3被負(fù)向調(diào)控,NF-κB1被正向調(diào)控;②與健康對(duì)照組比較,腎移植受者血清miR-338-5p水平顯著下降(P<0.001)、血清sBAFF水平顯著增高(P<0.01)。移植術(shù)后1年內(nèi)

4、者血清miR-338-5p水平顯著低于移植術(shù)后1年以上者(P<0.01);移植術(shù)后3年內(nèi)者血清miR-338-5p水平顯著低于移植術(shù)后3年以上者(P<0.01);③對(duì)全部研究對(duì)象進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析顯示,血清miR-338-5p與sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗體均呈顯著負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為-0.51(P<0.001)、-0.322(P<0.05);術(shù)后3年內(nèi)者,血清miR-338-5p與抗HLA-Ⅱ抗體、抗MICA抗體均呈顯著負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別

5、為-0.423(P<0.05)、-0.411(P<0.05);術(shù)后3年以上者,血清miR-338-5p與抗MICA抗體、抗HLA&MICA抗體均呈顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為0.486(P<0.05)、0.578(P<0.01);⑷CD20+B淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示,存在BAFF信號(hào)共同作用時(shí),miR-338-5p經(jīng)靶向作用于TRAF3增強(qiáng)了BAFF信號(hào),使得B細(xì)胞分泌IgG顯著增多(132±5.29ng/ml vs155±5.5