高銅飼料對鴨乙型肝炎病毒的作用.pdf

1、背景及目的：在長期的臨床工作中，我們發(fā)現(xiàn)肝豆狀核變性很少合并乙型肝炎病毒感染，肝豆狀核變性患者感染乙型肝炎病毒的機率明顯低于一般人群。肝豆狀核變性的病理基礎(chǔ)是銅過量。過量的銅誘導氧自由基產(chǎn)生，可以導致脂質(zhì)過氧化，引起生物膜和生物大分子的損害。銅在細胞核內(nèi)的聚積可破壞DNA聚合酶的活性，使核酸鏈斷裂，堿基氧化。核內(nèi)銅與DNA結(jié)合還可促進局部羥自由基產(chǎn)生，加重DNA的損傷。因此，肝豆狀核變性病人難以感染乙型肝炎的機理可能是：肝豆狀核變性引起

2、的肝細胞銅含量增高可能對HBV的吸附、穿透、轉(zhuǎn)錄、復制等一種或多種過程有嚴重影響。因此我們提出：提高肝銅含量是否可以對抗HBV感染呢? 鴨乙型肝炎病毒(DHBV)屬于嗜肝DNA病毒科，其形態(tài)結(jié)構(gòu)、核酸組成、生物學特性以及發(fā)病機理等方面與乙型肝炎病毒(HBV)相似，是研究HBV分子生物學、發(fā)病機理及抗HBV藥物最常用的動物模型。 但是，國內(nèi)市場沒有現(xiàn)成鴨乙型肝炎感染動物模型供應(yīng)；長沙地區(qū)尚無鴨乙型肝炎病毒感染資料；鴨乙型肝

3、炎病毒檢測目前常用的方法為同位素標記斑點雜交。為了探討肝銅含量增加對嗜肝DNA病毒的影響，我們進行了這一研究。 方法：1、建立常規(guī)PCR檢測鴨乙肝病毒DNA的方法，檢查長沙地區(qū)麻鴨DHBV的感染率。2、建立SYBRGreenⅠ實時定量PCR檢測DHBVDNA的方法，并與常規(guī)PCR進行比較。3、構(gòu)建插入DHBVDNA片段的重組質(zhì)粒，作為DHBVDNA含量檢測的定量標準。4、初步探討硫酸銅飼養(yǎng)對麻鴨的毒性、能否在鴨肝內(nèi)蓄積并抑制鴨乙

4、肝病毒。 結(jié)論：1.首次報道了長沙地區(qū)麻鴨DHBV的感染率。長沙地區(qū)麻鴨DHBV自染攜帶病毒率較高，是較為理想的HBV的動物模型。2.成功地構(gòu)建DHBVDNA重組質(zhì)粒，可以作為定量PCR檢測的陽性標準。3.國內(nèi)首次建立SYBR熒光定量PCR技術(shù)檢測鴨DHBVDNA新方法。SYBRGreenⅠ實時定量PCR檢測鴨乙肝病毒的方法簡便經(jīng)濟，敏感性和特異性優(yōu)于常規(guī)PCR法。4.大劑量硫酸銅對雛鴨毒性很大。5.較小劑量硫酸銅對成年麻鴨無明