乙型肝炎病毒對pDC與NK細胞之間相互作用的影響.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的持續(xù)感染與機體抗病毒免疫應答不足密切相關。自然殺傷細胞（Natural killer cell，NK cell）和漿樣樹突狀細胞(Plasmacytoid dendritic cell，pDC)是機體重要的天然免疫細胞。NK細胞能夠直接殺傷病毒感染的細胞，并且分泌抗病毒因子干擾素γ(Interferonγ,IFNγ)；pDC是體內(nèi)最主要的I型干擾素(Interferon，IFN

2、)分泌細胞。NK細胞和pDC之間的相互作用，在機體抗病毒免疫應答中起著非常重要的作用。HBV動物模型和慢性乙型肝炎患者中觀察到的宿主天然免疫缺陷，可能是導致HBV持續(xù)感染的主要原因。目前，慢性HBV感染中天然免疫缺陷的具體機制尚不完全清楚。
　　 本研究通過體外細胞實驗，分析乙型肝炎病毒對外周血pDC與NK細胞之間相互作用的影響。分離來自同一個健康成年人的外周血pDC和NK細胞，以pDC:NK=1:5的比例將兩者共同培養(yǎng)48小時

3、，在共培養(yǎng)體系中加入HepG2.2.15細胞來源的HBV，同時設有不含HBV的陰性對照組。在pDC-NK細胞共培養(yǎng)體系中加入CpG-A作為pDC的刺激物；加入單純皰疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)作為DNA病毒的對照物。采用流式細胞技術測定細胞表面分子的表達水平，特異酶聯(lián)免疫吸附方法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)以及細胞內(nèi)細胞因子染色法(Intracellul

4、ar staining，ICS)測定細胞因子的含量。測定NK細胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶的含量，以及NK細胞對K562靶細胞的殺傷能力，從而判定NK細胞的殺傷毒性。
　　 pDC與NK細胞培養(yǎng)48小時后，在HBV不存在的情況下，二者均明顯活化，表現(xiàn)為細胞活性分子表達增加和細胞功能的提高。當培養(yǎng)體系中存在HBV時：
　　 (1) HBV不影響NK細胞誘導的pDC的活性和IFNa的分泌。培養(yǎng)液中存在HBV時，CpG刺激的情況下，pD

5、C單獨培養(yǎng)以及NK-pDC共培養(yǎng)體系中CD83和CD86的表達水平均下降，而NK細胞誘導的pDC分泌的IFNα水平?jīng)]有顯著變化。
　　 (2) HBV不影響pDC誘導的NK細胞的活性和細胞殺傷毒性。pDC誘導的NK細胞表面活化分子(如CD69、CD25及HLA-DR)的表達不受HBV的影響。此外，HBV的出現(xiàn)也不影響pDC對NK細胞殺傷毒性的顯著增強作用。
　　 (3) HBV抑制pDC誘導的NK細胞分泌的IFNr。pD

6、C-NK共培養(yǎng)體系中加入其它病毒（如HSV）時，pDC誘導的NK細胞分泌的IFNr顯著增加。而加入HBV后，pDC誘導的NK細胞分泌的IFNγ水平顯著降低，不論pDC活性刺激物CpG是否存在。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，HBV對活化的NK細胞分泌IFNr沒有直接的抑制作用。由此可見，pDC-NK細胞共培養(yǎng)體系中IFNr水平的降低是由于HBV抑制pDC與NK細胞之間相互作用所致。
　　 與其他病毒（如HSV）相比，HBV非但不促進并且抑制p

7、DC與NK細胞之間的相互作用。本實驗觀察到HBV能夠顯著抑制pDC誘導的NK細胞分泌的IFNr，但并不影響NK細胞的殺傷活性。這與臨床上慢性乙型肝炎患者的NK細胞IFNγ分泌能力下降而殺傷活性不變相一致。
　　 綜上所述，HBV激活機體天然免疫系統(tǒng)的能力差，并且抑制pDC與NK細胞之間的相互作用，增加了持續(xù)感染的可能性。慢性乙型肝炎患者中NK細胞出現(xiàn)的功能損傷是否由于HBV抑制pDC與NK細胞之間相互作用所導致，有待進一步闡明。