HO-1對(duì)高糖和AGEs作用下大鼠腹膜間皮細(xì)胞氧化應(yīng)激及TGF-β1、FN 表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究血紅素加氧酶-1（HO-1）表達(dá)變化對(duì)高糖和晚期糖基化終產(chǎn)物（AGEs）作用下的體外培養(yǎng)的大鼠腹膜間皮細(xì)胞（RPMCs）氧化應(yīng)激水平及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）、纖維連接蛋白（FN）表達(dá)與分泌的影響，探討HO-1在腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維化中的作用及可能機(jī)制，為臨床上腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維化的防治提供新的靶點(diǎn)。
　　 方法：⑴體外原代培養(yǎng)大鼠腹膜間皮細(xì)胞（RPMCs），經(jīng)形態(tài)及免疫化學(xué)鑒定，取第3-5代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)

2、；⑵采用高糖和AGEs作用于RPMCs；采用鈷原卟啉（CoPP）和鋅原卟啉（ZnPP）分別誘導(dǎo)和抑制RPMCs的HO-1表達(dá)；⑶采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、免疫印記（Western Blot）法檢測(cè)細(xì)胞HO-1的基因和蛋白的表達(dá)；⑷比色法檢測(cè)上清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）的水平；⑸半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)TGF-β1、FN的基因和

3、蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①在體外成功培養(yǎng)RPMCs，第2代細(xì)胞經(jīng)形態(tài)及免疫化學(xué)鑒定，確定為腹膜間皮細(xì)胞。②高糖、AGEs均可以導(dǎo)致RPMCs培養(yǎng)上清液中MDA水平升高（P<0.05），GSH、SOD水平下降（P<0.05）；呈濃度和時(shí)間依賴性（P<0.05）。③高糖+AGEs聯(lián)合組RPMCs的HO-1、TGF-β1、FN的mRNA和蛋白表達(dá)及MDA含量均顯著高于高糖或AGEs單獨(dú)刺激組（P<0.05），GSH、SOD含量均低于

4、高糖或AGEs單獨(dú)刺激組（P<0.05）。④經(jīng)HO-1誘導(dǎo)劑CoPP預(yù)先干預(yù)的RPMCs在高糖+AGEs的聯(lián)合作用下，其HO-1基因和蛋白表達(dá)比未干預(yù)組顯著上調(diào)（P<0.05），TGF-β1、FN的基因和蛋白表達(dá)顯著下降（P<0.05），MDA水平顯著降低（P<0.05），GSH、SOD水平均顯著上升（P<0.05）。⑤經(jīng)HO-1抑制劑ZnPP預(yù)先干預(yù)的RPMCs在高糖+AGEs的聯(lián)合作用下，其HO-1基因和蛋白表達(dá)比未干預(yù)組顯著降低（

5、P<0.05），TGF-β1、FN的基因和蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（P<0.05），MDA水平顯著升高（P<0.05），GSH、SOD水平均顯著下降（P<0.05）。
　　 結(jié)論：⑴高糖和AGEs可使RPMCs發(fā)生氧化應(yīng)激，且使TGF-β1、FN的表達(dá)升高，同時(shí)誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)上升。⑵誘導(dǎo)HO-1的過(guò)表達(dá)可以顯著抑制大鼠腹膜間皮細(xì)胞氧化應(yīng)激水平和TGF-β1、FN的表達(dá)。⑶抑制HO-1的表達(dá)可顯著加劇大鼠腹膜間皮細(xì)胞氧化應(yīng)激水平和TG