螺內酯對醛固酮誘導的大鼠腎小球系膜細胞氧化應激及TGF-β1表達的影響.pdf

1、目的：觀察螺內酯(Spironolactone,SPI)對醛固酮(Aldosterone,ALD)誘導的大鼠腎小球系膜細胞( Mesangial cells, MCs)氧化應激和轉化生長因子β-1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)表達的影響,探討ALD致糖尿病腎病(Diabetic nephropathy, DN)及SPI腎保護作用的可能機制。
　　方法：體外培養(yǎng)大鼠MCs,隨機分組如下:

2、
　?、貼C組:正常對照組(低糖DMEM培養(yǎng)液,葡萄糖濃度為5.6mmol/L);
　?、贏LD組:醛固酮刺激組：
　　ALD1組:低糖DMEM培養(yǎng)液中加入醛固酮(10-5mol/L)刺激;ALD2組:低糖DMEM培養(yǎng)液中加入醛固酮(10-7mol/L)刺激;ALD3組:低糖DMEM培養(yǎng)液中加入醛固酮(10-9mol/L)刺激。
　　③SPI組:螺內酯干預組：
　　SPI1組:醛固酮(10-7mol/L)刺

3、激的同時加入螺內酯(10-7mol/L)干預;SPI2組:醛固酮(10-7mol/L)刺激的同時加入螺內酯(10-8mol/L)干預;SPI3組:醛固酮(10-7mol/L)刺激的同時加入螺內酯(10-9mol/L)干預。48小時后分別收集細胞及上清液。應用流式細胞術檢測細胞內活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain

4、reaction,RT-RCR)方法檢測細胞TGFβ-1、醛固酮合成酶(CYP11B2)、醛固酮受體( Mineralocorticoid receptor, MR)和11β-羥類固醇脫氫酶2(11β-hydroxysteroid dehydrogenase2,11β-HSD2)mRNA表達;ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測細胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1蛋白濃度。
　

5、　結果：1.RT-PCR法檢測結果顯示MCs表達CYP11B2、MR和11β-HSD2 mRNA;
　　2.ALD對腎小球MCs內ROS產生的影響：
　　ALD刺激MCs48h后,細胞內ROS水平顯著增加,ALD1,2,3組分別為(21.77±0.87)、(17.33±0.49)、(15.25±0.63),組間差異顯著,P＜0.01;與NC組(4.28±0.50)相比,差異顯著(P均＜0.01)。
　　3.ALD對腎小

6、球MCs TGFβ-1 mRNA表達及蛋白分泌的影響：
　　半定量RT-PCR檢測發(fā)現,NC組系膜細胞可低水平表達 TGFβ-1 mRNA(1.22±0.14)及蛋白(0.78±0.12ng/ml)。ALD作用48 h后,TGFβ-1 mRNA表達及蛋白分泌顯著增加,兩指標在不同濃度ALD組之間分別比較,組間差異顯著(P均＜0.05)。
　　4.螺內酯對醛固酮誘導的腎小球MCs內ROS產生的影響：
　　醛固酮(10-7

7、mol/L)刺激的同時加入螺內酯干預后,SPI1,2,3組細胞內ROS水平顯著降低,分別為(7.34±0.89)、(9.25±0.65)、(10.9±0.97),組間差異顯著,P＜0.01;與ALD2組(17.33±0.49)相比,差異顯著(P均＜0.05)。SPI1組ROS水平稍高于NC組,差異無顯著性(P＞0.05)。
　　5.SPI對ALD誘導的腎小球MCs TGFβ-1 mRNA表達及蛋白分泌的影響：
　　醛固酮(1

8、0-7mol/L)刺激的同時加入螺內酯干預后,SPI1,2,3組MCs TGFβ-1 mRNA表達及蛋白分泌均較ALD2組顯著下降(P＜0.01或0.05),兩指標分別進行組間比較,差異具有顯著性(P均＜0.05)。
　　6.腎小球MCs ROS產生和TGFβ-1 mRNA表達及蛋白分泌的相關性分析：
　　MCs產生的ROS和TGFβ-1 mRNA表達及蛋白分泌分別呈正相關(r=0.866, P＜0.01;r=0.823,P