糖腎飲對高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞TGF-β-,1-表達(dá)的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎病是糖尿病的一種嚴(yán)重血管并發(fā)癥，是導(dǎo)致慢性腎功能衰竭的重要因素，也是引起糖尿病患者死亡的主要原因，其發(fā)病機(jī)制還未完全明了，目前的研究認(rèn)為糖尿病腎病與遺傳易感因素、氧化應(yīng)激、腎小球外細(xì)胞基質(zhì)堆積、多種細(xì)胞因子表達(dá)異常、糖基化終末產(chǎn)物產(chǎn)生過多、凝血機(jī)制異常等有關(guān)，其中長期高血糖是糖尿病腎病發(fā)生的關(guān)鍵原因，高血糖造成腎臟血流動力學(xué)改變以及葡萄糖本身代謝異常所致的一系列后果是造成腎臟病變的基礎(chǔ)，生長因子、細(xì)胞因子激活則是病變形成的

2、直接機(jī)制。在被激活的各種生長因子中，轉(zhuǎn)化生長因子-β1是參與糖尿病腎病細(xì)胞外基質(zhì)積聚、腎小球纖維化等關(guān)鍵的因子，TGF-β1可促進(jìn)腎小球中功能活躍的系膜細(xì)胞分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)，研究表明阻斷TGF-β1可以明顯減輕糖尿病腎臟病變。迄今為止尚未發(fā)現(xiàn)能非常有效地阻止糖尿病腎病進(jìn)程的西藥，我國一直在進(jìn)行中醫(yī)藥治療糖尿病腎病的研究并取得一定進(jìn)展，近年研究發(fā)現(xiàn)，多種中藥成分可防治糖尿病腎病，但目前中醫(yī)藥對糖尿病腎病治療作用的研究大多是單味藥的機(jī)理研

3、究，不能體現(xiàn)中藥多組分、多靶點(diǎn)和多系統(tǒng)作用的優(yōu)勢，中藥復(fù)方可通過多途徑、多環(huán)節(jié)發(fā)揮對糖尿病腎病的治療作用。糖腎飲是一種復(fù)方制劑，已有臨床實踐證實糖腎飲對糖尿病腎病有顯著療效，但機(jī)制未闡明。本實驗通過觀察糖腎飲含藥血清對高糖環(huán)境下腎系膜細(xì)胞TGF-β1蛋白濃度的影響，探討糖腎飲治療糖尿病腎病的可能機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。 方法：糖腎飲(組方：生地黃30g、山藥15g、茯苓10g、赤芍15g、澤瀉5g、山萸肉10g

4、、黃連5g、葛根10g)水煎并濃縮至含生藥2g/mL，采用正常Wistar雄性大鼠5只，每日分別灌喂糖腎飲2mL，每日1次，連續(xù)14天，于末次給藥2h后，用5％水合氯醛1ml/100g行腹腔麻醉，剖腹后于下腔靜脈處取血，離心取血清并保存，為含糖腎飲大鼠血清。另采用正常Wistar大鼠5只，每日分別灌喂生理鹽水2mL，每日1次，連續(xù)14天，于末次給生理鹽水2h后，用5％水合氯醛1ml/100g腹腔麻醉后于下腔靜脈處取血，離心取血清，為正常

5、大鼠血清。取對數(shù)生長期的腎小球系膜細(xì)胞配成細(xì)胞數(shù)為3×104/ml轉(zhuǎn)接種于24孔板上，每孔1ml。貼壁生長24h以后，加無血清的培養(yǎng)基，24h以后細(xì)胞基本同步化。按加入的大鼠血清及葡萄糖濃度把腎小球系膜細(xì)胞分為8組，其中，A組：含10％正常大鼠血清，葡萄糖5.6mmol/L；B組：含10％正常大鼠血清，葡萄糖30mmol/L；C組：含20％正常大鼠血清，葡萄糖5.6mmol/L；D組：含20％正常大鼠血清，葡萄糖30mmol/L；E組：

6、含10％糖腎飲血清，葡萄糖5.6mmol/L；F組：含10％糖腎飲血清，葡萄糖30mmol/L；G組：含20％糖腎飲血清，葡萄糖5.6mmol/L；H組：含20％糖腎飲血清，葡萄糖30mmol/L；根據(jù)實驗分組的不同加入相應(yīng)的培養(yǎng)液。每組設(shè)2個平行孔，培養(yǎng)48h后收集上清，采用ELISA法測定每孔上清液TGF-β1的濃度。 結(jié)果：各組檢測TGF-β1濃度的結(jié)果如下：A組：5.16±0.38ng/ml；B組：9.62±0.45ng

7、/ml；C組：5.72±0.69ng/ml；D組：10.99±0.53ng/ml；E組：5.09±0.31ng/ml；F組：5.41±0.35ng/ml；G組：5.21±0.50ng/ml；H組：4.26±0.34ng/ml。B組與A組、D組與C組、F組與B組、H組與D組、H組與F組比較差異具有顯著性(P=0)。A、C、E、G組各組間比較無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論：正常葡萄糖濃度下腎小球系膜細(xì)胞可表達(dá)一定水平的TGF-