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文檔簡介
1、[目的]
應用RNAi技術靶向封閉人肝癌HepG2細胞的PEG10基因,觀察PEG10基因表達下調(diào)對Wnt/β-catenin信號通路的關鍵因子β-catenin和Wnt1基因表達水平的影響,及對肝癌HepG2細胞增殖和凋亡的影響,探討PEG10基因?qū)nt/β-catenin信號通路的影響在人肝癌發(fā)病機制中的作用,為肝癌的基因治療提供新思路。
[方法]
應用脂質(zhì)體轉染技術將靶向PEG10的短發(fā)
2、夾狀RNA(short hairpin RNA,shRNA)轉染HepG2細胞,利用半定量RT-PCR和免疫組化法分別檢測PEG10、β-catenin和Wnt1基因mRNA及蛋白表達水平;同時應用MTT比色試驗檢測細胞增殖及應用流式細胞儀檢測細胞凋亡。
[結果]
1.轉染PEG10特異的shRNA能明顯抑制HepG2細胞中PEG10基因mRNA及蛋白的表達,與未轉染對照組比較,其抑制率分別為65.6%、60
3、.5%。
2.成功下調(diào)PEG10基因表達后,HepG2細胞中β-catenin和Wnt1 mRNA及蛋白的表達均隨之明顯下調(diào),與未轉染對照組比較,其mRNA水平抑制率分別為52.5%、96.1%,其蛋白水平抑制率分別為89.1%、78.6%。
3.轉染PEG10-shRNA(10nM)24小時后對HepG2細胞增殖和凋亡均無明顯影響(P>0.05)。
[結論]
1.PEG10基因?qū)?/p>
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