RNAi介導(dǎo)PEG10基因沉默對肝癌HepG2細(xì)胞Wnt-β-catenin信號通路及增殖、凋亡的影響.pdf

1、[目的]
　　 應(yīng)用RNAi技術(shù)靶向封閉人肝癌HepG2細(xì)胞的PEG10基因，觀察PEG10基因表達(dá)下調(diào)對Wnt/β-catenin信號通路的關(guān)鍵因子β-catenin和Wnt1基因表達(dá)水平的影響，及對肝癌HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影響，探討PEG10基因?qū)nt/β-catenin信號通路的影響在人肝癌發(fā)病機(jī)制中的作用，為肝癌的基因治療提供新思路。
　　 [方法]
　　 應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將靶向PEG10的短發(fā)

2、夾狀RNA(short hairpin RNA，shRNA)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，利用半定量RT-PCR和免疫組化法分別檢測PEG10、β-catenin和Wnt1基因mRNA及蛋白表達(dá)水平；同時(shí)應(yīng)用MTT比色試驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖及應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。
　　 [結(jié)果]
　　 1.轉(zhuǎn)染PEG10特異的shRNA能明顯抑制HepG2細(xì)胞中PEG10基因mRNA及蛋白的表達(dá)，與未轉(zhuǎn)染對照組比較，其抑制率分別為65.6％、60

3、.5％。
　　 2.成功下調(diào)PEG10基因表達(dá)后，HepG2細(xì)胞中β-catenin和Wnt1 mRNA及蛋白的表達(dá)均隨之明顯下調(diào)，與未轉(zhuǎn)染對照組比較，其mRNA水平抑制率分別為52.5％、96.1％，其蛋白水平抑制率分別為89.1％、78.6％。
　　 3.轉(zhuǎn)染PEG10-shRNA(10nM)24小時(shí)后對HepG2細(xì)胞增殖和凋亡均無明顯影響(P>0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.PEG10基因?qū)?/p>