白介素10基因治療大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷性痛的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究探索IL-10的高效真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-IL-10對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷性痛的持續(xù)治療效果.實(shí)驗(yàn)分為三部分:第一部分 IL-10真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建 目的:構(gòu)建一個(gè)具有生物活性的IL-10真核表達(dá)質(zhì)粒.擬解決三個(gè)問(wèn)題:(1)選擇合適的信號(hào)肽基因和真核表達(dá)質(zhì)粒;(2)正確構(gòu)建IL-10真核表達(dá)質(zhì)粒;(3)大量制備IL-10真核表達(dá)質(zhì)粒以用于體內(nèi)外轉(zhuǎn)染研究.結(jié)論:該實(shí)驗(yàn)通過(guò)兩步PCR方法將人單核細(xì)胞化學(xué)趨化蛋白Ⅰ的信號(hào)肽基

2、因序列加到IL-10cDNA,再通過(guò)酶切、連接等技術(shù),成功構(gòu)建了含信號(hào)肽的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-IL-10.第二部分 pcDNA3.1-IL-10體外轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究 目的:探討pcDNA3.1-IL-10在上皮樣細(xì)胞ECV304、巨噬細(xì)胞RAW264.7和脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)IL-10的能力,以及其對(duì)脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子的影響,以驗(yàn)證pcDNA3.1-IL-10轉(zhuǎn)染這些細(xì)胞后產(chǎn)生IL-10的能力及其生物學(xué)活

3、性,為應(yīng)用該質(zhì)粒治療大鼠坐骨神經(jīng)痛的實(shí)驗(yàn)研究作準(zhǔn)備.結(jié)論:pcDNA3.1-IL-10在星形膠質(zhì)細(xì)胞、ECV304細(xì)胞、AW264.7細(xì)胞中具有較強(qiáng)的表達(dá)IL-10的能力;其轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細(xì)胞后可以長(zhǎng)時(shí)間分泌IL-10;pcDNA3.1-IL-10顯著抑制活化星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子;SA脂質(zhì)體在體外具有很強(qiáng)的傳遞基因的能力.第三部分 白介素10基因治療大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷性痛的實(shí)驗(yàn)研究 目的:觀察pcDNA3.1-IL-10對(duì)大

4、鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷性痛的治療效果.該研究擬解決的問(wèn)題:(1)建立大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷性痛模型;(2)探討pcDNA3.1-IL-10在坐骨神經(jīng)、腰段脊髓、海馬、血漿等組織的表達(dá)情況;(3)探討pcDNA3.1-IL-10對(duì)坐骨神經(jīng)、腰段脊髓、海馬等組織TNFα的影響;(4)探討pcDNA3.1-IL-10對(duì)坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷性痛大鼠行為學(xué)的影響.結(jié)論:鞘內(nèi)注射pcDNA3.1-IL-10能顯著減輕大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷性痛,