轉(zhuǎn)錄因子PAX5-BSAP在兒童白血病細(xì)胞中表達(dá)特性的研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文轉(zhuǎn)錄因子PAX5BSAP在兒童白血病細(xì)胞中表達(dá)特性的研究姓名：張蓓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：沈立松20040401相對(duì)表達(dá)量分別為235％和252％；而在T一和髓系細(xì)胞株中幾乎不表達(dá)。本研究中所建立的實(shí)時(shí)定量RT—PCR是種簡(jiǎn)單、快速、方便的方法，可迸一步用于更多I臨床不同Jf[L液惡性腫瘤樣本的觀察研究。第二部分WesternBlotting分析血液腫瘤細(xì)胞BSAP表達(dá)水平為了觀察血液

2、腫瘤細(xì)胞中BSAP蛋白質(zhì)表達(dá)水平，初步探討其與PAX5mRNA表達(dá)水平之間的關(guān)系。采用WesternBlotting分析了6個(gè)血液腫瘤細(xì)胞株和4個(gè)臨床樣本(包括2例BALL，l例TALL和1例AML)中BSAP表達(dá)水平。本研究的免疫印跡實(shí)驗(yàn)運(yùn)用特殊的蛋白提取試劑提取細(xì)胞總蛋白，經(jīng)SDS—PAGE電泳、電轉(zhuǎn)移，與針對(duì)BSAP的單抗及HRP標(biāo)記的二抗反應(yīng)，最后采用化學(xué)發(fā)光法顯色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在B系細(xì)胞中檢測(cè)到一52KD的BSAP條帶，但在T一

3、和髓系細(xì)胞中為陰性；且BSAP條帶的深淺與運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT—PCR檢測(cè)到的PAX5mRNA表達(dá)量高低具有一致性，因此認(rèn)為PAX5mRNA表達(dá)水平與BSAP蛋白表達(dá)水平相一致。第三部分PAX5mRNA表達(dá)與兒童急性白血病的相關(guān)性研究為了進(jìn)一步了解急性白血病中PAX5mRNA的表達(dá)特性，初步分析探討PAX5基因表達(dá)與各臨床或?qū)嶒?yàn)室指標(biāo)之間的關(guān)系，本研究運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT—PCR測(cè)定了6例正常兒童、58例初發(fā)和4例復(fù)發(fā)急性白血病兒童(其中包括3

4、9例BALL，10例TALL和13例AML)骨髓細(xì)胞中PAX5mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，BALL組比TALL組和AML組的PAX5mRNA表達(dá)高(P=O02q和P=O013)，而與正常對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。TALL組和AML組的PAX5mRNA表達(dá)水平均低于正常對(duì)照組，而TALL組與AML組之間的表達(dá)無(wú)差異。在BALL患兒中，PAX5mRNA表達(dá)的個(gè)體差異很大。在BALL的不同臨床危險(xiǎn)度分組中，PAX5mRNA高表達(dá)的患兒主要分布

5、于中危組中。PAX5在Pre—B和CAIL這二個(gè)BALL亞型中的表達(dá)無(wú)顯著性差異。此外還發(fā)現(xiàn)，初發(fā)治療前組和復(fù)發(fā)組的BALL患兒PAX5mRNA表達(dá)高于化療完全緩解組(P=O011和P=O006)。由于在CDl9基因的啟動(dòng)子上有BSAP的結(jié)合位點(diǎn)，本研究發(fā)現(xiàn)在BALL中PAX5表達(dá)水平與同樣用實(shí)時(shí)定量RT—PCR檢測(cè)的CDl9表達(dá)水平之間存在明顯的相關(guān)性，提示：PAX5可能參與CDl9表達(dá)調(diào)控。綜上所述，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT—PCR方法能快