羅格列酮逆轉(zhuǎn)人胃癌細(xì)胞多藥耐藥及其機(jī)制的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討PPARγ配體羅格列酮(RSG)能否逆轉(zhuǎn)有多藥耐藥表型的人胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞對絲裂霉素C(MMC)的耐藥性,并進(jìn)一步探討RSG逆轉(zhuǎn)人胃癌SGC7901/VCR多藥耐藥的可能機(jī)制。 方法:實驗分成空白對照組、MMC組、RSG組、CSA+MMC組和RSG+MMC組,以不同濃度的RSG和MMC分別作用于SGC7901/VCR和SGC7901細(xì)胞,應(yīng)用:(1)生長曲線測定RSG對人胃癌多藥耐藥細(xì)胞系SGC7901/

2、VCR及其親代生長的影響;(2)MTT比色法及集落形成實驗研究RSG對MMC抑制上述兩株人胃癌細(xì)胞細(xì)胞增殖的影響;(3)流式細(xì)胞儀技術(shù)及AO-EB熒光染色研究RSG對MMC誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR細(xì)胞凋亡的影響;(4)流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期分析。(5)RT-PCR和western-blot法檢測多藥耐藥相關(guān)基因MDR1、MRP基因及凋亡相關(guān)的Livin基因及P-gp蛋白表達(dá)的變化,并進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果:(1)20

3、μM濃度的RSG對人胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞及SGC7901細(xì)胞的生長無明顯抑制作用,與未用藥組比較差異無顯著性(P>0.05),而40μM以上濃度的RSG則對SGC7901/VCR及SGC7901細(xì)胞生長的具有明顯抑制作用,與對照組比較差異有顯著性(P<0.05),且其作用和RSG濃度呈時間-劑量依賴關(guān)系;(2)MMC對人胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞及SGC7901細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為9.1mg·L-1和0.7

4、3mg·L-1,耐藥倍數(shù)為12.4倍,兩組比較差異有顯著性(P<0.01),表明SGC7901/VCR細(xì)胞對MMC耐藥;RSG對SGC7901/VCR細(xì)胞及SGC7901細(xì)胞的IC50分別為75.9μM和58.4μM,兩組IC50比較差異無顯著性(P>0.05),說明SGC7901/VCR對RSG無耐藥性;(3)RSG+MMC組中,RSG的濃度由0μM遞增至80μM,MMC對SGC7901/VCR細(xì)胞的IC50由9.1mg·L-1降至0

5、.87mg·L-1,20、40、80μMRSG對SGC7901/VCR的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.84、9.6、10.5;40μMRSG逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR對MMC耐藥性與4μg·L-1CSA的作用相當(dāng)(P>0.05),表明RSG能逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR細(xì)胞株對MMC的耐藥性,其作用與RSG濃度呈劑量依賴關(guān)系;(4)集落形成實驗結(jié)果顯示:RSG(40μM)+MMC(1mg·L-1)組的集落形成率與MMC(1mg·L-1)組、ROS(4

6、0μM)組比較,差異有顯著性(P<0.01);其與CSA(4μg·L-1)+MMC(1mg·L-1)組效果相似(P>0.05),說明RSG與MMC聯(lián)用減少SGC7901/VCR細(xì)胞的集落形成率;(5)AO-EB染色及流式細(xì)胞儀檢測對SGC7901/VCR細(xì)胞凋亡的影響顯示相似的結(jié)果:RSG+MMC組對誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞株的凋亡率增高,與空白對照組、RSG組、MMC組差異有顯著性(P<0.01),與CSA+MMC組比較差異亦有

7、統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),說明RSG與MMC聯(lián)用能增強(qiáng)MMC對誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞凋亡的作用;(6)RT-PCR及Western-blot結(jié)果顯示:①RSG組、RSG+MMC組SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)PPARγmRNA表達(dá)較空白對照組、MMC組及CSA組明顯升高(P<0.05),提示RSG能誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞PPARγ的表達(dá);②空白對照組(無處理的SGC7901/VCR細(xì)胞)與SGC7901細(xì)胞比較,MDR1

8、mRNA、P-gp及LivinmRNA的表達(dá)均明顯升高(P<0.01),顯示SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)MDR1、Livin基因的表達(dá)較SGC7901細(xì)胞內(nèi)強(qiáng);③MRP在SGC7901/VCR細(xì)胞、SGC7901細(xì)胞內(nèi)的均未見明顯陽性表達(dá)條帶;④RSG組及RSG+MMC組對MDR1mRNA、P-gp及LivinmRNA在SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)表達(dá)下調(diào),與空白對照組和MMC組比較降低,差異有顯著性意義(P<0.05),但和CSA聯(lián)用

9、MMC比較,差異無顯著性(P>0.05),說明RSG、CSA均能抑制MDR1、Livin基因在SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。 結(jié)論:(1)40μM以上濃度的RSG對SGC7901/VCR及SGC7901細(xì)胞生長的均有抑制作用,且SGC7901/VCR細(xì)胞株對其不具耐藥性;(2)RSG能部分逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR對MMC的耐藥性;(3)RSG能誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞株的凋亡;(4)多藥耐藥基因MDR1及凋亡抑制基因

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