羅格列酮逆轉(zhuǎn)人胃癌細(xì)胞多藥耐藥及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討PPARγ配體羅格列酮(RSG)能否逆轉(zhuǎn)有多藥耐藥表型的人胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞對(duì)絲裂霉素C(MMC)的耐藥性，并進(jìn)一步探討RSG逆轉(zhuǎn)人胃癌SGC7901/VCR多藥耐藥的可能機(jī)制。 方法：實(shí)驗(yàn)分成空白對(duì)照組、MMC組、RSG組、CSA+MMC組和RSG+MMC組，以不同濃度的RSG和MMC分別作用于SGC7901/VCR和SGC7901細(xì)胞，應(yīng)用：(1)生長(zhǎng)曲線測(cè)定RSG對(duì)人胃癌多藥耐藥細(xì)胞系SGC7901/

2、VCR及其親代生長(zhǎng)的影響；(2)MTT比色法及集落形成實(shí)驗(yàn)研究RSG對(duì)MMC抑制上述兩株人胃癌細(xì)胞細(xì)胞增殖的影響；(3)流式細(xì)胞儀技術(shù)及AO-EB熒光染色研究RSG對(duì)MMC誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR細(xì)胞凋亡的影響；(4)流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期分析。(5)RT-PCR和western-blot法檢測(cè)多藥耐藥相關(guān)基因MDR1、MRP基因及凋亡相關(guān)的Livin基因及P-gp蛋白表達(dá)的變化，并進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果：(1)20

3、μM濃度的RSG對(duì)人胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞及SGC7901細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制作用，與未用藥組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，而40μM以上濃度的RSG則對(duì)SGC7901/VCR及SGC7901細(xì)胞生長(zhǎng)的具有明顯抑制作用，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.05)，且其作用和RSG濃度呈時(shí)間-劑量依賴關(guān)系；(2)MMC對(duì)人胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞及SGC7901細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為9.1mg·L-1和0.7

4、3mg·L-1，耐藥倍數(shù)為12.4倍，兩組比較差異有顯著性(P＜0.01)，表明SGC7901/VCR細(xì)胞對(duì)MMC耐藥；RSG對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞及SGC7901細(xì)胞的IC50分別為75.9μM和58.4μM，兩組IC50比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，說(shuō)明SGC7901/VCR對(duì)RSG無(wú)耐藥性；(3)RSG+MMC組中，RSG的濃度由0μM遞增至80μM，MMC對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞的IC50由9.1mg·L-1降至0

5、.87mg·L-1，20、40、80μMRSG對(duì)SGC7901/VCR的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.84、9.6、10.5；40μMRSG逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR對(duì)MMC耐藥性與4μg·L-1CSA的作用相當(dāng)(P＞0.05)，表明RSG能逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR細(xì)胞株對(duì)MMC的耐藥性，其作用與RSG濃度呈劑量依賴關(guān)系；(4)集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：RSG(40μM)+MMC(1mg·L-1)組的集落形成率與MMC(1mg·L-1)組、ROS(4

6、0μM)組比較，差異有顯著性(P＜0.01)；其與CSA(4μg·L-1)+MMC(1mg·L-1)組效果相似(P＞0.05)，說(shuō)明RSG與MMC聯(lián)用減少SGC7901/VCR細(xì)胞的集落形成率；(5)AO-EB染色及流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞凋亡的影響顯示相似的結(jié)果：RSG+MMC組對(duì)誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞株的凋亡率增高，與空白對(duì)照組、RSG組、MMC組差異有顯著性(P＜0.01)，與CSA+MMC組比較差異亦有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明RSG與MMC聯(lián)用能增強(qiáng)MMC對(duì)誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞凋亡的作用；(6)RT-PCR及Western-blot結(jié)果顯示：①RSG組、RSG+MMC組SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)PPARγmRNA表達(dá)較空白對(duì)照組、MMC組及CSA組明顯升高(P＜0.05)，提示RSG能誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞PPARγ的表達(dá)；②空白對(duì)照組(無(wú)處理的SGC7901/VCR細(xì)胞)與SGC7901細(xì)胞比較，MDR1

8、mRNA、P-gp及LivinmRNA的表達(dá)均明顯升高(P＜0.01)，顯示SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)MDR1、Livin基因的表達(dá)較SGC7901細(xì)胞內(nèi)強(qiáng)；③MRP在SGC7901/VCR細(xì)胞、SGC7901細(xì)胞內(nèi)的均未見(jiàn)明顯陽(yáng)性表達(dá)條帶；④RSG組及RSG+MMC組對(duì)MDR1mRNA、P-gp及LivinmRNA在SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)表達(dá)下調(diào)，與空白對(duì)照組和MMC組比較降低，差異有顯著性意義(P＜0.05)，但和CSA聯(lián)用

9、MMC比較，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，說(shuō)明RSG、CSA均能抑制MDR1、Livin基因在SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。 結(jié)論：(1)40μM以上濃度的RSG對(duì)SGC7901/VCR及SGC7901細(xì)胞生長(zhǎng)的均有抑制作用，且SGC7901/VCR細(xì)胞株對(duì)其不具耐藥性；(2)RSG能部分逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR對(duì)MMC的耐藥性；(3)RSG能誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞株的凋亡；(4)多藥耐藥基因MDR1及凋亡抑制基因