肝腫瘤細(xì)胞多藥耐藥機(jī)制及其逆轉(zhuǎn)的研究.pdf

1、血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)是血紅素代謝的限速酶，具有多種生物活性，如抗炎、抗氧化、抗凋亡、調(diào)節(jié)微循環(huán)等?，F(xiàn)有大量的報(bào)道，在腫瘤耐藥的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有血紅索加氧酶-1過(guò)表達(dá)的現(xiàn)象。同時(shí)，腫瘤的多藥耐藥性是現(xiàn)在腫瘤化療失敗的一個(gè)重要原因。因此，探討血紅素加氧酶．1高表達(dá)與肝腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性之間的關(guān)系，對(duì)于深入認(rèn)識(shí)腫瘤多藥耐藥的機(jī)制有重要的理論意義，并且對(duì)于提高腫瘤的化療效果有重要的實(shí)際價(jià)值。 目的：

2、通過(guò)增加和降低血紅素加氧酶-1的表達(dá)量，檢測(cè)兩種肝腫瘤耐藥標(biāo)志物P-170和GST-π的表達(dá)量及P-170的功能變化，確定血紅素加氧酶-1是否是肝腫瘤多藥耐藥產(chǎn)生的原因之一。 方法:首先分別用血紅素加氧酶-1的誘導(dǎo)劑(Hemin)和抑制劑(Zinc(Ⅱ)protorphyrin Ⅸ)對(duì)肝癌耐藥細(xì)胞株Bel/Fu作用24小時(shí)，然后用MTT法檢測(cè)肝耐藥細(xì)胞Bel/Fu對(duì)5-氟尿嘧啶，阿霉素，絲裂霉素三種化療藥物的存活率：再用RT-P

3、CR的方法檢測(cè)血紅素加氧酶-1，P-GP，GST-π在mRNA水平的表達(dá)量；用Western Blotting的方法檢測(cè)P-GP在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)量，并以Actin，beta作為內(nèi)參；用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測(cè)GST-π在Bel/Fu細(xì)胞中的表達(dá)量；用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P-GP的外排藥物的功能。 結(jié)果： 1．MTT結(jié)果： (1)經(jīng)5-氟尿嘧啶作用24小時(shí)后，Hemin組細(xì)胞的存活率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，znp

4、p組細(xì)胞的存活率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。 (2)經(jīng)阿霉素作用24小時(shí)后，Hemin組細(xì)胞的存活率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，znpp組細(xì)胞的存活率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。 (3)經(jīng)絲裂霉素作用24小時(shí)后，Hemin組細(xì)胞的存活率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，znpp組細(xì)胞的存活率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。 2．RT-PCR結(jié)果： (1)隨Hemin濃度的逐漸升高，血紅素加氧酶-

5、1基因的表達(dá)量逐漸增加；隨Zinc(Ⅱ)protorphyrin Ⅸ濃度的逐漸升高，血紅素加氧酶-1基因的表達(dá)量逐漸減少。 (2)隨Hemin濃度的逐漸升高，MDR-1基因的表達(dá)量逐漸增加；Zinc(Ⅱ)protorphyrin Ⅸ濃度的逐漸升高，MDR-1基因的表達(dá)量逐漸減少。 (3)隨Hemin濃度的逐漸升高，GST-π基因的表達(dá)量逐漸增加；Zinc(Ⅱ)protorphyrin Ⅸ濃度的逐漸升高，GST-π基因的表

6、達(dá)量逐漸減少。 3．Western blotting結(jié)果： 隨Heroin濃度的逐漸升高，P-GP的蛋白質(zhì)表達(dá)量逐漸增加；隨Zinc(Ⅱ)protorphyrin Ⅸ濃度的逐漸升高，P-GP的蛋白質(zhì)表達(dá)量逐漸減少。 4．免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果： 細(xì)胞爬片中Hemin組的細(xì)胞中GST-π蛋白的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組；而znpp組的細(xì)胞中GST-π蛋白的表達(dá)量明顯的低于對(duì)照組。 5．流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果：

7、隨Hemin濃度的逐漸升高，P-GP的藥物外排功能逐漸提高；Zinc(Ⅱ)protorphyrin Ⅸ濃度的逐漸升高，P-GP的藥物外排功能逐漸下降。 結(jié)論： 1．驗(yàn)證了Hemin誘導(dǎo)血紅素加氧酶-1在肝癌耐藥細(xì)胞Bel/Fu的高表達(dá)，Zinc(Ⅱ)protorphyrin Ⅸ抑制血紅素加氧酶-1在肝癌耐藥細(xì)胞Bel/Fu的低表達(dá)。 2．血紅素加氧酶-1的表達(dá)量與腫瘤耐藥標(biāo)志物P-gp和GST-π的表達(dá)量呈正相關(guān)