搏癌丸誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡及其機制的實驗研究.pdf

1、目的:觀察搏癌丸體外誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞系HepG-2細(xì)胞凋亡,初步探討其作用機制,為將搏癌丸開發(fā)成治療肝癌的新型中藥制劑提供科學(xué)的實驗依據(jù).方法:采用藥物血清學(xué)和細(xì)胞藥理學(xué)方法,對比觀察(陰性無藥物血清對照、陽性藥5-氟尿嘧啶對照)搏癌丸對HepG2細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)調(diào)控基因Bax、Bcl-2及抑癌基因P53基因的影響.主要觀察指標(biāo)及方法如下:1.以MTT法觀察五個搏癌丸藥物血清濃度對HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用,從中選出搏癌丸的三個有效藥

2、物血清濃度.2.以10％搏癌丸藥物血清處理HepG2細(xì)胞48小時后,電鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化.3.以流式細(xì)胞儀檢測凋亡峰.4.免疫組織化學(xué)染色(SABC)法檢測搏癌丸三個有效藥物濃度對Bax、Bcl-2、P53基因表達(dá)的調(diào)控.結(jié)果:1.搏癌丸對HepG 2細(xì)胞增殖的影響:10%、5%、2.5%搏癌丸藥物血清三個有效濃度均對HepG2細(xì)胞增殖有顯著抑制作用,P<0.01,其抑制率分別為31.5±3.43%、20.34±2.54%和12.6

3、641.98%;增殖抑制作用隨藥物濃度增高而有加強趨勢,三個有效濃度組間均有顯著性差異,P<0.01.2.10%搏癌丸藥物血清處理HepG2細(xì)胞48小時后電鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:透視電鏡觀察結(jié)果表明,搏癌丸藥物血清作用后,HepG2細(xì)胞核明顯縮小,核漿比減少,核仁減少、濃縮甚至消失,核內(nèi)異染色質(zhì)明顯增多,核膜完整可見早、中、晚期細(xì)胞凋亡,出現(xiàn)凋亡小體.3.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明:10%搏癌丸藥物血清作用HepG2細(xì)胞24小時、48小時

4、后,FCM檢測的細(xì)胞凋亡率分別為18.31%、25.3%,均顯著高于相應(yīng)無藥物對照組的3.54%,p<0.05.4.搏癌丸對人肝癌細(xì)胞系HepG2凋亡調(diào)控基因表達(dá)的影響:搏癌丸能上調(diào)HepG2凋亡調(diào)控基因Bax、P53的表達(dá),與無藥物血清對照組比較,有顯著性差異,P<0.05,且呈劑量依賴關(guān)系.搏癌丸對凋亡抑制基因bcl-2無顯著影響.結(jié)論:1.癌丸能在一定程度上抑制人肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞的增殖.2.搏癌丸具有誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞系Hep