青藤堿誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的： 采用不同濃度的青藤堿（sinomenine，SN）處理人肝癌細(xì)胞HepG2，從細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及抑制率來(lái)研究青藤堿對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的抑制作用。并通過(guò)檢測(cè)不同濃度青藤堿作用后survivin的變化，探討青藤堿誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞survivin的表達(dá)與青藤堿介導(dǎo)HepG2細(xì)胞G2/M期阻滯的關(guān)系，以及survivin在青藤堿誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡機(jī)制中的作用。 方法： 通過(guò)倒置顯微鏡觀察拍照，SRB實(shí)驗(yàn)，A

2、O/EB，Hoechst熒光染色等技術(shù)檢測(cè)SN對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布及凋亡率，相對(duì)定量RT-PCR測(cè)定survivinmRNA的表達(dá)、Western blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因survivin的表達(dá)。 結(jié)果： SN能顯著抑制人肝癌細(xì)胞HepG2生長(zhǎng)，并具有時(shí)間濃度依賴(lài)性。SN作用24h、48h、72h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為1.44、1.21、0.39mM

3、。1.6 mM SN作用48h后，Hoechst熒光核染，人肝癌細(xì)胞HepG2核出現(xiàn)聚縮、片段化和周邊化，呈現(xiàn)典型的凋亡特征。FCM顯示細(xì)胞被阻滯于G2/M期，隨藥物濃度的增加，細(xì)胞凋亡率逐漸增加。相對(duì)定量RT-PCR結(jié)果顯示SN能下調(diào)HepG2細(xì)胞survivin mRNA的表達(dá)。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示青藤堿可以抑制HepG2細(xì)胞survivin的表達(dá)，并隨作用濃度的加大，Survivin的表達(dá)量減低；并發(fā)現(xiàn)Surviv

4、in在SN作用24h出現(xiàn)高表達(dá)。 結(jié)論： （1）SN具有對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖抑制作用，并具有時(shí)間濃度依賴(lài)性。 （2）SN具有誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞凋亡的作用，有時(shí)間濃度依賴(lài)性。 （3）SN使細(xì)胞增殖受阻于細(xì)胞周期G2/M期。 （4）survivin在SN誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，隨著SN濃度的升高，Survivin蛋白的表達(dá)下調(diào)，引起細(xì)胞凋亡。 （5）SN抑制HepG2細(xì)胞survi