7型腺病毒E1基因和5型腺病毒E1A基因的克隆及表達(dá).pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文7型腺病毒E1基因和5型腺病毒E1A基因的克隆及表達(dá)姓名：沈鑫烽申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：呂建新;彭穎20080501溢螺醫(yī)學(xué)陵魏圭學(xué)位淪文結(jié)果：l 、A d 的分離培養(yǎng)和基因組D N A 提取、酶切鑒定 病毒基因組D N A 的B a m H l 、脅療d l l l 和S i n a i 酶切圖譜，對照國外文獻(xiàn)，從B a m H I 的帶型初步確定本次分離的A d 毒株為A d 7 d 2

2、 型。2 、p l R E S - N e o ．A d 7 E 1 A 重組質(zhì)粒的構(gòu)建，A d 7E I A 基因的表達(dá)、免疫印跡分析雙酶切及測序結(jié)果表明p I R E S ，N e o ．A d 7 E I A 表達(dá)載體謄句建成功。R T - P C R 和免疫印跡結(jié)果最示A d 7 E 1 A 基因已被成功轉(zhuǎn)染入A 5 4 9 細(xì)胞并產(chǎn)生表達(dá)。3 、p l R E S - A d 7 E I A ．E 1 B 重組質(zhì)粒的構(gòu)建，A

3、d 7 E 1 A 、E 1 B 基因的表達(dá) 雙酶切及測序結(jié)果表明p l R E S —A d 7 E t A —E 1 B 表達(dá)載體構(gòu)建成功。R T - P C R 結(jié)果顯示A d 7 E 1 A 。E1 B 基因已被成功轉(zhuǎn)染入A 5 4 9 細(xì)胞并產(chǎn)生表達(dá)。4 、p l R E S ．N e o ．A d 5 E 1 A 重組質(zhì)粒的構(gòu)建，A d 5 E I A 基因的表達(dá)、免疫鞠跡分析雙酶切及測序結(jié)果表明p l R E S ．N e

4、 o - A d 5 E I A 表達(dá)載體構(gòu)建成功。R T —P C R 和免疫印跡結(jié)果顯示A d 5 E 1 A 基因已被成功轉(zhuǎn)染入A 5 4 9 細(xì)胞并產(chǎn)生表達(dá)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功分離和鑒定了A d 7 d 2 瘸毒株，并成功構(gòu)建了A d 7E I A 、A d 7 E I A - E I B 和A d 5E I A 的真核表達(dá)體系，為進(jìn)～步探討A d 7 E I 基因的腫瘤基函治療效應(yīng)及應(yīng)用前景提供方法，并為A d 7 溶癌腺病毒的