乙酰甲喹及其代謝物的抑菌活性和對(duì)雞原代肝細(xì)胞毒性的研究.pdf

1、動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留問(wèn)題一直備受關(guān)注，喹噁啉類藥物中喹乙醇、卡巴氧由于其代謝物3-甲基-喹噁啉-2羧酸(MQCA)及喹噁啉-2-羧酸(QCA)的三致毒性已被許多國(guó)家限制使用，乙酰甲喹(MEQ)作為其同類藥物，由于其對(duì)沙門氏菌、大腸桿菌具有良好的抗菌效果而被廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床。目前，有很多文獻(xiàn)報(bào)道乙酰甲喹原藥抗菌活性或毒性方面的問(wèn)題，但是研究發(fā)現(xiàn)乙酰甲喹在動(dòng)物體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化為多種代謝產(chǎn)物，有關(guān)這些代謝產(chǎn)物的抗菌活性及其毒性方面的研究鮮有

2、報(bào)道。本研究通過(guò)合成乙酰甲喹的5種主要代謝物，研究其在雞體內(nèi)外的抗菌活性，探討乙酰甲喹良好抗菌作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)通過(guò)檢測(cè)對(duì)雞肝細(xì)胞周期的影響及細(xì)胞凋亡，研究代謝物對(duì)雞體外肝細(xì)胞的毒性，探討乙酰甲喹產(chǎn)生毒性作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，為乙酰甲喹殘留的安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。
　　試驗(yàn)1乙酰甲喹五種主要代謝物的合成與鑒定
　　在已有研究基礎(chǔ)上，采用乙酰甲喹為反應(yīng)起始原料，通過(guò)Na2S2O4或NaBH4為還原劑，還原合成了MEQ的5種主要代謝物

3、（M1、M2、M3、M4和M5）。在合成過(guò)程中，定時(shí)取樣上高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)代謝物的合成反應(yīng)過(guò)程，通過(guò)重結(jié)晶純化被分析的各種化合物。采用質(zhì)譜、核磁等對(duì)合成的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，并根據(jù)定量分析中的面積歸一化法，采用高效液相色譜儀測(cè)定代謝物的百分含量。試驗(yàn)結(jié)果表明:成功制得所需的幾種代謝物，且其百分含量都大于96％，基本滿足毒理學(xué)試驗(yàn)要求。
　　試驗(yàn)2乙酰甲喹及其代謝物對(duì)雞體內(nèi)及體外抗菌活性
　　采用96孔板法測(cè)定乙

4、酰甲喹及其代謝物對(duì)雞源性大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、雞白痢沙門氏菌的最小抑菌濃度。將100只13日齡雛雞隨機(jī)分為A（大腸桿菌組）、B（沙門氏菌組）、C（金葡菌組）、D（空白對(duì)照組）4個(gè)大組，分別用于研究乙酰甲喹及代謝物M1對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金葡菌的治療效果。每個(gè)菌組雞試驗(yàn)開始時(shí)人工感染細(xì)菌使其發(fā)病，然后經(jīng)口灌服MEQ、M1，連用5天，觀察治療效果。接種細(xì)菌前和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)分別稱量各組雞的體重，記錄雛雞初始和結(jié)束時(shí)體重，計(jì)算每組的死亡率、

5、相對(duì)增重率、各感染組的平均增重與健康對(duì)照組的平均增重之比。試驗(yàn)結(jié)果表明:乙酰甲喹對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌及金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度分別為2μg/mL、8μg/mL及16μg/mL;代謝物M1對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度為32μg/mL,對(duì)沙門氏菌及金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度均為128μg/mL。代謝物M1對(duì)雞大腸桿菌、沙門氏菌都具有一定的治療效果，且有促進(jìn)雞生長(zhǎng)的作用，但治療效果及促生長(zhǎng)作用都不及MEQ。
　　試驗(yàn)3乙酰甲喹及其代謝