對氨基苯胂酸誘導(dǎo)大鼠原代肝細(xì)胞凋亡的毒性研究.pdf

1、由于對氨基苯胂酸廣泛用于畜禽飼料添加劑中,不僅對畜禽產(chǎn)品造成殘留,而且還對環(huán)境帶來污染,日益威脅生態(tài)環(huán)境,為此我們進(jìn)行了該研究.研究目的:探討有機(jī)砷劑——對氨基苯腫酸對體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞的毒性損傷作用,并闡明其作用機(jī)理,推究對氨基苯胂酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的最低濃度,為對氨基苯腫酸的飼料添加標(biāo)準(zhǔn)提供更科學(xué)的理論依據(jù),同時(shí)對其飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)和食品安全性作出更準(zhǔn)確的評價(jià).研究方法:該實(shí)驗(yàn)以大鼠原代肝細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?采用Seglen改良二步膠原酶灌注法

2、分離肝細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng);用噻唑蘭(MTT)法檢測濃度分別為0、5、50、500 μmol/L和5、10mmol/L的對氨基苯胂酸對大鼠原代肝細(xì)胞的殺傷作用;檢測DNA Ladder梯狀帶以判定是否發(fā)生了凋亡;用黃嘌呤氧化酶法檢測對氨基苯胂酸對肝細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞培養(yǎng)液中的S0D活性的影響,同時(shí)分別測定細(xì)胞中GSH-Px活性和細(xì)胞培養(yǎng)液中H2O2的變化;用免疫組織化學(xué)法檢測凋亡誘導(dǎo)蛋白Bax表達(dá)的改變.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:采用Seglen改良二步膠原酶灌注法

3、分離肝細(xì)胞,其活率在85~95％之間;50 μmol/L的對氨基苯胂酸對肝細(xì)胞的生長具有抑制作用,并有時(shí)間劑量依賴性;分別在24h、48h時(shí)檢測到了DNA Ladder梯狀帶,說明對氨基苯胂酸誘導(dǎo)了肝細(xì)胞凋亡;細(xì)胞培養(yǎng)液中的SOD活性在50~500 μ mol/L的對氨基苯胂酸作用下明顯降低,500 μ mol/L的對氨基苯胂酸能使細(xì)胞培養(yǎng)液中的H2O2活性在染毒后24h升高;5 μmol/L和500 μ mol/L的對氨基苯胂酸分別使