缺氧缺血性新生大鼠腦皮質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子的表達(dá)及參附注射液的干預(yù)作用.pdf

1、目的：研究缺氧缺血性新生大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子氧調(diào)節(jié)蛋白150(oxygen regulate protein150，ORP150)、X-盒結(jié)合蛋白1(X-box binding protein1，XBP-1)和CHOP(C/EBP homologous protein，CHOP)的表達(dá)變化，以探討它們在缺氧缺血性腦損傷中的作用，并初步探討參附注射液(SFI)干預(yù)治療后對其影響及可能機(jī)制。
　　 方法：將新生7H齡S

2、prague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(S)、生理鹽水對照組(C)、參附治療組(SF)。每一組按照觀測的時間點(diǎn)不同分為3h、6h、12h、24h、3d、7d六個亞組，每個亞組8只。用Rice法制備新生大鼠H1BD模型。在每個時間點(diǎn)將大鼠斷頭取右側(cè)皮質(zhì)腦組織，采用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測大鼠皮層腦組織中ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA表達(dá)變化；采用Western-Blot法測定ORP15

3、0及CHOP的蛋白表達(dá)變化；用TUNEL染色法檢測相應(yīng)時間點(diǎn)光鏡下腦皮質(zhì)組織的凋亡細(xì)胞。
　　 結(jié)果：
　　 1．RT-PCR條帶顯示假手術(shù)組ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA表達(dá)很弱；生理鹽水對照組與參附治療組ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA在缺氧缺血(HI)后3h即表達(dá)增加，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；ORP150mRNA在HI后6h仍有較高表達(dá)，12h及24h即明顯下降，

4、7d時接近假手術(shù)組。參附治療組ORP150mRNA在HI后各時間點(diǎn)的表達(dá)水平均接近生理鹽水對照組(P＞0.05)；XBP-1mRNA及CHOPmRNA的表達(dá)量分別在HI后6h、12h時達(dá)到峰值，之后均有所回落，7d時接近假手術(shù)組水平；其中參附治療組XBP-1mRNA及CHOPmRNA表達(dá)量12h、24h、3d時均較生理鹽水對照組明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2．Westem-bolt蛋白印跡顯示假手術(shù)組O

5、RP150及CHOP的蛋白均有少量表達(dá)；生理鹽水對照組與參附治療組ORP150及CHOP蛋白在HI后3h即表達(dá)增加，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；HI后12-24h ORP150蛋白表達(dá)明顯下降，7d時接近假手術(shù)組。參附治療組ORP150在HI后各時間點(diǎn)的蛋白表達(dá)水平均接近生理鹽水對照組(P＞0.05);HI后CHOP蛋白表達(dá)在24h達(dá)到高峰，3d后下降，7d時接近假手術(shù)組。參附治療組CHOP蛋白表達(dá)量12h、24h

6、、3d時較生理鹽水對照組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 3．HI后3h生理鹽水對照組與參附治療組即發(fā)現(xiàn)結(jié)扎側(cè)腦皮質(zhì)有少量的凋亡細(xì)胞，隨著缺氧缺血時間的延長，凋亡細(xì)胞逐漸增多，24h達(dá)到高峰后下降；SF組在HI后24h、3d、7d均明顯低于C組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．新生大鼠腦缺氧缺血后誘發(fā)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，ORP150、XBP-1及CHOP參與了新生大鼠HIBD后遲發(fā)性神經(jīng)