兔脫鈣異體骨關(guān)節(jié)移植的關(guān)節(jié)滑液和血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　長(zhǎng)期以來(lái)國(guó)內(nèi)外的眾多學(xué)者都在從事關(guān)節(jié)軟骨損傷的研究。大量的實(shí)驗(yàn)已證實(shí)生長(zhǎng)因子在維持關(guān)節(jié)軟骨的正常形態(tài)發(fā)揮著重要的作用，同時(shí)也有許多的研究表明在關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)的過(guò)程中脫鈣異體骨關(guān)節(jié)發(fā)揮誘導(dǎo)作用。本實(shí)驗(yàn)是在新西蘭大白兔右肘關(guān)節(jié)缺損處植入脫鈣異體骨關(guān)節(jié)，應(yīng)用體液蛋白質(zhì)組學(xué)的方法分析移植后血清與關(guān)節(jié)滑液樣本中是否具有相同的蛋白，且其與關(guān)節(jié)缺損不移植組和正常關(guān)節(jié)組的差別，以期找到機(jī)體出現(xiàn)在移植后關(guān)節(jié)軟骨再生過(guò)程中的特異性蛋白質(zhì)

2、，并用其來(lái)研究相關(guān)蛋白質(zhì)在關(guān)節(jié)軟骨再生過(guò)程中的作用機(jī)制和模型，為尋找促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨再生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)提供新思路和新線索。
　　方法：
　　選取16只重約2.5kg的新西蘭大白兔，并隨機(jī)分成3組，Ⅰ組為實(shí)驗(yàn)組，兔子8只，在兔橈骨近段造成20mm長(zhǎng)骨關(guān)節(jié)缺損并移植脫鈣異體骨；Ⅱ組為陽(yáng)性對(duì)照組，兔子4只，在兔橈骨近段造成20mm長(zhǎng)骨關(guān)節(jié)缺損并曠置關(guān)節(jié)軟骨缺損。Ⅲ組為空白對(duì)照組，兔子4只，不對(duì)兔關(guān)節(jié)作處理。首先完成陽(yáng)性對(duì)照組的建立，將切取

3、出來(lái)的骨關(guān)節(jié)制成脫鈣骨，留待移植至實(shí)驗(yàn)組，然后建立實(shí)驗(yàn)組。此后分別在移植術(shù)后第4周、第8周、第12周、第16周抽取各組關(guān)節(jié)液和血清并進(jìn)行2D-PAGE和MADLI-TOF-MS分析，進(jìn)入相關(guān)的數(shù)據(jù)庫(kù)查證鑒定所得的數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　新西蘭大白兔的肘關(guān)節(jié)軟骨缺損模型的成功建立，并使用自制的脫鈣骨關(guān)節(jié)引發(fā)機(jī)體對(duì)肘關(guān)節(jié)軟骨缺損進(jìn)行修復(fù)，應(yīng)用2D-PAGE分離兔的肘關(guān)節(jié)滑液和血清中所出現(xiàn)的每種蛋白質(zhì)，分別發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)液實(shí)驗(yàn)組與陽(yáng)性、

4、空白對(duì)照組比較，血清實(shí)驗(yàn)組與陽(yáng)性、空白對(duì)照組比較，均存在明顯的差異蛋白點(diǎn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理的變化趨勢(shì)，挑選出30個(gè)有意義的差異蛋白點(diǎn)，通過(guò)酶質(zhì)譜分析，按差異點(diǎn)的分子量以及肽段序列，進(jìn)入數(shù)據(jù)庫(kù)搜索查詢，雖然在關(guān)節(jié)液實(shí)驗(yàn)組不出現(xiàn)相關(guān)的有意義的蛋白，但在血清實(shí)驗(yàn)組中確定出現(xiàn)了GI值分別為136466、126722803、126723746三種蛋白，這三種蛋白質(zhì)可能與關(guān)節(jié)軟骨再生相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　血清在關(guān)節(jié)軟骨再生的過(guò)程中出現(xiàn)

5、了特異性的蛋白質(zhì)，這三種蛋白質(zhì)及其所屬族群的功能分別是：GI值為136466的TTR蛋白屬于transthyretin家族，通過(guò)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)參與基因復(fù)制、修復(fù)與表達(dá)；GI值為126722803的ALB蛋白是血漿中主要的蛋白質(zhì)，具有良好的結(jié)合與抗氧化能力，保護(hù)細(xì)胞的正常形態(tài)等重要作用；GI值為126723746的RBP4蛋白在血漿中，RBP-維生素A復(fù)合物與甲狀腺素相互作用，通過(guò)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)參與基因表達(dá)的過(guò)程啟動(dòng)。按照本身及其基因族群