“癬立消”姜射梔中藥配方涂膜劑的研制.pdf

1、家兔皮膚癬菌病（Dermato-mycosis）是由多種皮膚絲狀菌引起的具有強(qiáng)烈傳染性的人獸共患皮膚真菌病，危害極為嚴(yán)重。其主要病原有犬小孢子菌、須癬毛癬菌和石膏樣小孢子菌。近年來，臨床上大量使用毒副作用較強(qiáng)的抗真菌化學(xué)藥物造成真菌耐藥性迅速發(fā)展，而毒副作用較小的天然藥物中多味藥均具有抗真菌活性。為了有效利用豐富的中藥資源，本研究篩選出20味中藥中體外抗菌活性較強(qiáng)的幾味中藥，并研究其聯(lián)合抑菌活性，從而將無拮抗作用的幾味中藥組方制成制劑用

2、于臨床觀察其療效及毒性研究。相關(guān)的研究結(jié)果如下:
　　1.20味中藥的體外抗真菌活性的研究:通過乙醇回流、水煎煮和超聲波等方法提取20味中藥中的抗菌活性部位，采用液體微量稀釋法(Broth MicrodilutionSusceptibility Method，M38-A)測(cè)定其對(duì)石膏樣小孢子菌等四株真菌的體外抗菌活性;并研究抗菌活性較強(qiáng)的幾味中藥的體外聯(lián)合抑菌活性。研究結(jié)果:射干、白鮮皮、五倍子和苦參四味中藥提取物對(duì)四株真菌的最低

3、抑菌濃度值(Minimal inhibitoryconcentration，MIC)范圍在1.563～12.5 mg/ml，姜黃、杜仲、赤芍、梔子、連翹和柴胡6味中藥提取物的MIC值范圍在6.25～50 mg/ml;選取其中抑菌活性強(qiáng)的五倍子、姜黃、射干和梔子進(jìn)行聯(lián)合抑菌活性的研究，得出射干、姜黃和梔子的聯(lián)合抑菌指數(shù)(FICI)≤2，五倍子和射干、姜黃、梔子的聯(lián)合抑菌指數(shù)(FICI)＞2。上述結(jié)果表明:射干、五倍子、姜黃、梔子對(duì)四株真菌

4、均具有較好的體外抗真菌活性;射干、姜黃、梔子為無關(guān)或相加、協(xié)同的作用，可用于組方研究;五倍子和射干、姜黃、梔子為拮抗作用。
　　2.中藥原藥鑒定及提取工藝的研究:按照《中國(guó)藥典》2010年版一部中規(guī)定的方法，通過薄層層析法將篩選出來的無拮抗作用的姜黃、射干、梔子三味中藥，進(jìn)行原料藥的鑒定;并采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，綜合考慮提取方法、溶劑、料液比、提取次數(shù)、提取時(shí)間等五種影響因素，以浸膏得率及其最低抑菌濃度(MIC)值為指標(biāo)，對(duì)三味中藥有

5、效物質(zhì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。研究結(jié)果:三個(gè)供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，各味藥最佳的提取工藝分別為:姜黃粗粉(20目)80％乙醇溶液（6倍量），加熱回流提取3次，每次2h;射干粗粉(20目)70％乙醇溶液(10倍量)，加熱回流提取3次，每次2h;梔子粗粉(20目)80％甲醇溶液（6倍量）浸泡0.5h后超聲提取2h。上述結(jié)果表明:姜黃、射干、梔子三味中藥均符合藥典中的標(biāo)準(zhǔn)藥材，且最佳提取工藝下姜黃、

6、射干、梔子三種提取物浸膏對(duì)四株真菌的MIC值和分別是31.25mg/ml、25mg/ml、18.75mg/ml，抑菌效果明顯且提取工藝穩(wěn)定可行，
　　3.“姜射梔”中藥配方涂膜劑的研制及質(zhì)量控制:通過均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以體外聯(lián)合抑菌活性的MIC值為參考指標(biāo)，篩選出姜黃、射干、梔子三味藥聯(lián)合的最佳配比。以最佳配比設(shè)置低、中、高三個(gè)劑量為主藥的配方涂膜劑，并通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選涂膜劑的各個(gè)條件，研制出三個(gè)劑量的配方涂膜劑，以高效液相色譜法

7、測(cè)其中姜黃素含量。結(jié)果表明，姜黃、射干、梔子配方的最佳配比為4∶3∶2，三個(gè)劑量的配方涂膜劑配方如下:成膜溶液的添加量為PVA17888％、甘油2％;三味主藥按最佳配比混合添加比例分別為2.25％、6.75％、20.25％;增溶劑吐溫-80添加量分別為4％、5％、5％;透皮促進(jìn)劑添加比例為5％的1，2-丙二醇、8％的冰片;最佳制備工藝下低、中、高劑量的配方涂膜劑中姜黃素含量分別為:1.62μg/ml、3.74μg/ml、7.82μg/m

8、l.
　　4.“姜射梔”中藥配方涂膜劑的抗家兔感染皮癬菌的研究:用犬小孢子菌標(biāo)準(zhǔn)菌株人工感染健康家兔，采取有皮膚癥狀家兔的皮屑、被毛，進(jìn)行真菌學(xué)分離培養(yǎng)及鑒定以確定真菌菌懸液造模成功的最低濃度。采用最低濃度的菌懸液造模。分別用2.25％、6.75％、20.25％姜射梔中藥配方涂膜劑通過皮膚涂擦法治療家兔真菌皮癬病，并作療效對(duì)比觀察。結(jié)果表明，通過培養(yǎng)特性、菌落性狀、菌絲形態(tài)、孢子性狀特征等鑒定，確定造模成功的最低犬小孢子菌菌懸液的

9、濃度為1×108CFU/ml;6.75％、20.25％劑量組的配方涂膜劑對(duì)家兔真菌皮癬病均有較好的療效，其中20.25％配方涂膜劑對(duì)于家兔人工感染真菌皮癬病有治愈作用。
　　5.“姜射梔”中藥配方涂膜劑的安全性評(píng)價(jià):考慮到舔舐等原因，本研究對(duì)姜射梔中藥配方涂膜劑進(jìn)行經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)，以改良寇氏法測(cè)定組方涂膜劑的半數(shù)致死量;姜射梔配方涂膜劑為外用藥物，因而通過經(jīng)皮急性毒性試驗(yàn)、皮膚刺激性試驗(yàn)、皮膚過敏性試驗(yàn)、眼刺激試驗(yàn)和黏膜刺激性試