雞傳染性喉氣管炎病毒潛伏感染狀態(tài)下相關(guān)基因表達(dá)水平的研究.pdf

1、本研究根據(jù)傳染性喉氣管炎病毒 (Infectious Laryngotracheitis Virus，ILTV) SA-2株ICP4基因序列設(shè)計(jì)并合成3對(duì)引物，以ILTV WG株DNA為模板擴(kuò)增ICP4基因，并對(duì)其進(jìn)行了序列測(cè)定。將ILTV WG株的ICP4基因及其推導(dǎo)的氨基酸序列分別與ILTV SA-2株和其他皰疹病毒的ICP4基因及其推導(dǎo)的氨基酸序列比較后發(fā)現(xiàn)，ILTV毒株之間ICP4基因相對(duì)保守，核苷酸和氨基酸水平的同源性分別為9

2、9.7﹪和99.1﹪，但與其他α-皰疹病毒的ICP4基因的同源性則較低。對(duì)潛伏感染雞三叉神經(jīng)節(jié)中病毒基因的檢測(cè)顯示，在人工感染ILTV WG株后第10～60d內(nèi)均能檢測(cè)到ICP4特異RNA，而gB、gC、TK則未能檢出。 將20只4月齡SPF雞人工感染ILTVWG株，于感染后第39d翅靜脈和肌肉注射地塞米松(DEX)，感染后第5、9、10、11、12、39d及DEX處理后1、2、3、5、6、7、8d采喉拭子，檢測(cè)病毒DNA，并于

3、感染前和感染后第6、10、20、31d及DEX處理后第2、4、7、10、30d每組各取1只雞采集三叉神經(jīng)節(jié)，提總RNA后利用real-time RT-PCR的方法定量檢測(cè)了ICP4、IFN-γ和IL-18特異性tuRNA。結(jié)果表明，人工感染后處于潛伏狀態(tài)的病毒能再激活，并且ICP4基因在病毒還未被激活時(shí)就能低水平表達(dá)，這種低水平的立即早期(IE)基因的表達(dá)能提供持續(xù)的抗原刺激來(lái)維持神經(jīng)節(jié)中的炎性細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-18，以至于維持

4、病毒處于潛伏狀態(tài)而不致激活后感染其他的健康宿主；DEX處理后的第2d，IFN-γ的表達(dá)達(dá)到峰值，對(duì)病毒的再激活起抑制作用，盡管DEX處理前后IL-18的表達(dá)量沒(méi)有明顯的變化，可以推測(cè)當(dāng)潛伏的病毒一旦被激活時(shí)，IFN-γ協(xié)同IL-18起到抑制ILTV的作用。 因此，本研究的結(jié)果可作為確定雞群是否處于潛伏狀態(tài)及各種疫苗是否能引起潛伏感染的一種方法，并且為進(jìn)一步研究ICP4基因的功能、確定潛伏感染相關(guān)基因及潛伏感染時(shí)病毒抗原的持續(xù)表達(dá)