MicroRNA-197在代謝綜合征合并血栓性疾病作用的研究.pdf

1、背景：
　　MicroRNAs廣泛存在于真核生物中，是一類長約22個核苷酸的內源性小分子非編碼單鏈RNA，具有物種間的高度保守性。通過與靶mRNA結合而達到抑制或降解mRNA，進而發(fā)揮轉錄后的基因調控。microRNAs廣泛參與細胞生命的重要進程，包括早期發(fā)育，分化，細胞增殖和凋亡、脂肪代謝等過程。越來越多的研究顯示microRNAs作為一種微調節(jié)器，通過調節(jié)內皮細胞、血管平滑肌細胞、巨噬細胞的功能，在代謝綜合征、血栓性疾病的發(fā)生

2、及發(fā)展過程中扮演著重要的角色。目前尚無研究報道m(xù)icroRNA在代謝綜合征合并血栓性并發(fā)癥的生物學作用。
　　目的：
　　通過對代謝綜合征合并血栓性疾病患者和單純代謝綜合征（無合并血栓性疾?。┗颊哌M行microRNA表達譜分析和比較，同時結合體外細胞實驗初步探討miR-197在代謝綜合征合并血栓性疾病的生物學作用，進一步闡明代謝綜合征患者發(fā)生血栓性疾病的分子機制。
　　方法：
　?。?）病例收集及血標本的采集：實

3、驗隨機分為2組：①單純代謝綜合征組（A組），②代謝綜合征合并血栓性疾病組（B組）。每組病例分別入選5個，采集靜脈血3ml，抽血前確保志愿者無服用任何影響血小板功能的藥物；將采集到的血標本應用離心機進行離心1000r/min，10min，離心結束后吸取上層血漿分裝于1.5ml的EP管中作為本實驗標本，置于-80℃冰箱保存、備用。
　　（2）應用microRNA芯片法檢測標本中microRNA的表達譜。
　　（3）篩選micro

4、RNA，利用MiRror2.0 and DAVID v6.7進行靶基因預測。
　?。?）平滑肌細胞的培養(yǎng)：取3-5代人主動脈平滑肌細胞進行培養(yǎng)，單獨應用高糖或者高膽固醇以及聯(lián)合兩者進行干預，實驗隨機分成4組：①對照組（普通低糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)）；②高糖組（葡萄糖濃度30mM）；③高膽固醇組（ox-LDL40μg/ml）；④高糖高膽固醇組（30mM glucose+40μg/ml ox-LDL），分別處理24、48、72小時。

5、r>　?。?）Ⅰ型膠原蛋白的表達：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測Ⅰ型膠原蛋白的表達水平。
　　結果：
　?。?）與代謝綜合征組患者相比，代謝綜合征合并血栓性疾病組患者血漿 microRNA表達上調有統(tǒng)計意義的有102個，下調有統(tǒng)計意義的有33個（p<0.05）。
　　（2）在33個下調有統(tǒng)計意義的microRNAs中，代謝綜合征合并血栓性疾病組的miR-197水平為代謝綜合征組的0.45倍，具有顯著統(tǒng)計學意義（p<0.001

6、），并且，miR-197水平與空腹血糖、甘油三酯水平存在負相關傾向。
　　（3）靶基因預測結果顯示miR-197可能負向調控cathepsin K（CTSK）基因。cathepsin K為膠原蛋白降解酶。
　?。?）體外細胞實驗顯示：高糖組、高膽固醇組、高糖高膽固醇組Ⅰ型膠原蛋白水平低于對照組，并呈時間依賴性（p<0.05）。高糖高膽固醇組Ⅰ型膠原蛋白水平分別與高糖組、高膽固醇組比較均降低，具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。其

7、中，高糖高膽固醇作用人主動脈平滑肌細胞72小時合成的Ⅰ型膠原蛋白下降最明顯。（高糖高膽固醇組11.20±0.16ng/ml vs對照組80.1±0.34ng/ml）。
　　結論：
　?。?）與單純代謝綜合征患者相比，合并血栓性疾病的代謝綜合征患者血漿 miR-197明顯降低。
　　（2）模擬的代謝綜合征環(huán)境下，人主動脈平滑肌細胞膠原蛋白表達明顯下降。
　?。?）本研究推測，miR-197的下降可能導致靶基因cat